UbiQuant Kit的預期用途和檢測原理說明

泛素/蛋白酶體途徑（UPP）：泛素（Ub）對蛋白質的翻譯后修飾是一個影響幾乎所有細胞功能的關鍵調控過程。除了Ub在蛋白質降解中的既定作用外，Ub現在還參與了細胞信號傳導、DNA損傷反應、蛋白質運輸、細胞周期進程、炎癥、免疫反應和凋亡調節。泛素化是通過Ub的c端與目標底物上的賴氨酸（Lys）殘基的s-氨基之間的異肽連接而發生的(1)。Ub本身有7個賴氨酸殘基（K6、K11、K27、K29、K33、K48和K63），其中每個殘基都可以參與進一步的泛素化，生成polyUb鏈(2)。Ub通過各種賴氨酸形成聚合物的能力似乎是該系統在調節細胞過程中的多功能性的核心。這些聚合物最廣泛的特征是通過K48或K63.K48-linked polyUb連接，主要靶向蛋白酶體降解，而K63連接的polyUb似乎調節蛋白質功能、亞細胞定位或蛋白質-蛋白相互作用（3；4）。越來越多的證據表明K11連接的polyUb參與有絲分裂調控（5-7），對這種連鎖類型的研究范圍有望在未來幾年反映K48和K63。隨著疾病狀態和/或特定的細胞過程，對其他連鎖類型的興趣將呈指數級增長。泛素化是一個可逆的、動態的過程。泛素化機制，由E1、E2和E3等酶組成，在單體和聚合物狀態下協同作用于泛素化蛋白質。單鏈和聚脲鏈的對應去除（以及polyb鏈降解）是通過去泛素化酶（DUBs）完成的。

艾美捷UbiQuant Kit用于準確測定細胞和組織中總泛素（poly- + mono-）的濃度。該試劑盒僅用于研究用途，不用于人類或動物的診斷或治療應用。

UbiQuant ELISA是一種sandwich測定法，可以絕對測量細胞裂解物中的泛素。這種基于平板的測定依賴于使用專有的泛素結合試劑捕獲總泛素。酶聯抗泛素單克?。╒U-2）抗體產生由酶標儀評估的信號。使用泛素標準曲線可直接測量泛素濃度。

UbiQuant Kit部件：

除非另有說明，否則所有部件應儲存在4°-8°C的溫度下。

涂層板：提供一（1）個預涂層96孔條形板。這個將板干燥并真空包裝。如果未在一個內使用（1） 一個月取下盤子，在-80°C下儲存。

條形支架：提供一（1）個空條形板框架。

初級抗體（PA1）：1小瓶在PBS中的200倍mAb VU-2濃縮物含有0.02%NaN3。

標準品（pUb）：2瓶凍干泛素標準品（鏈+游離）。

小瓶中含有5個mg總泛素。

致敏試劑1（SR1）：2 mL 20倍原液（N.b.含有戊二醛）

增敏試劑2（SR2）：4 mL 8x原液

封閉濃縮液（BC）：12 mL 5X封閉劑

檢測抗體（DA1）：1小瓶200X抗小鼠HRP綴合物

塑料板密封：提供四（4）個

檢測試劑1（DR1）：魯米諾試劑0.5 mL小瓶

檢測試劑2（DR2）：0.5 mL穩定過氧化物試劑小瓶

UbiQuant Kit文獻參考：

1. Pickart, C. M. (2001) Mechanisms underlying ubiquitination Annu Rev Biochem 70, 503-33

2. Xu, P. and Peng, J. (2008) Characterization of polyubiquitin chain structure by middledown spectrometry Anal Biochem 80, 3438-3444

3. Ikeda, F. and Dikic, I. (2008) Atypical ubiquitin chains: new molecular signals. EMBO Rep 9, 536-542

4. Pickart, C. M. and Fushman, D. (2004) Polyubiquitin chains: polymeric protein signals Curr Opin Chem Biol 8, 610-616

5. Garnett, M. J., Mansfeld, J., Godwin, C., Matsusaka, T., Wul, J., Russell, P., Pines, J.,and Venkitaraman, A. R. (2009) UBE2S elongates ubiquitin chains on APC/C substrates to promote mitotic exit Nat Cell Biol 11, 1363-1369

6. Williamson, A., Wickliffe, K. E., Mellone, B. G., Song, L., Karpen, G. H., and Rape, M.(2010) Identification of a physiological E2 module for the human anaphase-promoting complex PNAS 106, 18213-18218

7. Wu, L., Nam, Y. J., Kung, G., Crow, M. T., and Kitsis, R. N. (2010) Induction of the apoptosis inhibitor ARC by Ras in human cancers J Biol Chem 285, 19235-19245