Abnova 抗駱駝刺（人源化VHH）親和樹脂FF：精準純化單域抗體的創新解決方案

駱駝科VHH抗體（也稱為單域抗體，sdAb或Ablynx的Nanobody）是一種約110個氨基酸長度的肽鏈，包含一個重鏈抗體的一個可變域（一個VHH片段）。與完整抗體一樣，駱駝科VHH抗體能夠特異性結合到特定抗原上。由于其體積小、生產簡單且親和力高，這種單域抗體在生物技術和治療研究領域有廣泛的應用。然而，它們的序列可能會增加在人體中引發免疫原性和抗藥物抗體（ADA）產生的風險，因此，在開發過程中，sdAbs通常會被進行人源化處理。抗人源化VHH親和樹脂FF是為從常用的蛋白表達系統（如細菌、酵母和哺乳動物細胞）中純化人源化VHH單域抗體而設計的。細胞裂解液中的VHH單域抗體能夠特異性地結合到連接在樹脂上的抗人源化VHH單克隆抗體上。通過嚴格的洗滌步驟消除非特異性結合反應，以高回收率洗脫純化的目標蛋白。表1列出了抗人源化VHH親和樹脂FF的主要特性。

作為Abnova全國總代理，艾美捷科技強烈推薦Abnova熱銷產品抗駱駝刺（人源化VHH）親和樹脂FF。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

需要但未提供的材料：

蒸餾水

微量移液器

微量離心管

渦旋混合器

試劑儲槽

空柱

血清學移液管（5 mL，10 mL）

細胞裂解緩沖液

蛋白酶抑制劑試劑

緩沖液（表2列出了可用于抗駱駝科VHH親和樹脂FF的必要緩沖液。）

實驗步驟：

樣本準備

為了獲得最佳結果，請按照以下建議進行樣本準備。

a. 根據蛋白特性準備樣本，優化裂解條件以最小化干擾蛋白結合的因素（見表3）。

b. 樣本不應含有任何不溶性顆粒。在純化前，通過過濾或在4°C下以高速離心10-15分鐘以去除不溶性物質。

c. 為防止純化過程中蛋白降解，樣本準備應在冰上進行和/或在細胞裂解過程中向樣本中添加蛋白酶抑制劑。

d. 在細胞裂解過程中，添加內切核酸酶以減少因染色體DNA或RNA釋放導致的樣本黏度增加。

e. 避免頻繁凍融。將裂解液/樣本分裝并保存于-80°C。

樹脂準備

a. 將空柱放置在穩固的支撐上；用TBS沖洗柱子一次。

b. 通過輕柔倒置徹底重懸樹脂，并立即將適當體積的懸浮液加載到柱子上。建議使用寬口徑移液頭以便于樹脂懸浮液的轉移。

c. 用TBS洗滌樹脂以平衡樹脂，重復3次，每次用3倍柱體積的TBS。讓緩沖液通過重力從柱子中排出；不要讓樹脂變干。

結合步驟

抗人源化VHH親和樹脂FF可以通過不同的方法純化駱駝科VHH單域抗體，包括柱色譜法、批量結合法以及免疫沉淀（IP）或各種常規中壓色譜系統（如AKTA純化系統）。如果樣本體積約為50 mL且人源化VHH單域抗體含量少于8 mg，建議使用2-4 mL沉淀樹脂的柱結合形式。對于較大體積的樣本，建議使用批量結合形式或AKTA純化系統（見第8節AKTA純化系統）以實現快速高效的純化。對于體積小且蛋白表達水平低的樣本，使用免疫沉淀法（見第7節人源化VHH單域抗體的免疫沉淀）。

產品圖片：

純化

從大腸桿菌裂解液中純化人源化VHH蛋白。泳道：（1）蛋白標記物，（2）全細胞裂解液，（3）流穿液，（4）目標人源化VHH信號域抗體-1（分子量=15 kDa）的洗脫液。

Abnova生產的所有產品，包括重組蛋白和抗體均采用目前國際上最先進的生產和SPF級動物設施。Abnova引進CFS先進的麥胚無細胞蛋白合成系統及獨有的全自動蛋白純化技術，向全球蛋白質學客戶提供最高品質的重組蛋白產品。Abnova通過與歐洲的分子生物學實驗室（EMBL，Eurpean Molecular Biology Laboratory）共同開發的單克隆抗體生產系統，包括高通量的抗原準備、多位點免疫、自動融合與篩選分析。其中MaxPab技術是Abnova專利的能雙重識別平面線性蛋白及三維空間結構上接近的蛋白的抗體技術，非常適合用于免疫學檢測，MaxPab抗體以真核表達的全長蛋白作為免疫原，制備純化而來，具有非常高的免疫識別功能，同時后繼的純化技術也保證了極高的特異性，非常適合免疫學檢測。