純化的大腸桿菌DNA旋轉酶藥物篩選試劑盒-藥物篩選實驗工具箱

TopoGEN純化的大腸桿菌DNA旋轉酶藥物篩選試劑盒旨在篩選新型的回轉酶靶向藥物，無論是作為界面毒物（或誘導DNA切割的IFP）還是催化抑制化合物（通過多種機制阻斷回轉酶作用的CIC）。它是一種易于采用的直接凝膠分析試劑盒。

DNA超螺旋分析：該藥物篩選試劑盒基于對提供的松弛質粒DNA底物（pHOT1，pBR322的衍生物）和約2.7 KB的回旋酶超螺旋作用。一個單位的gyrase在37℃下1小時內將超冷200-500ng。該酶通過符號反轉模型將負超螺旋引入松弛的pHOT1質粒底物中。能量輔因子（ATP）是完成超螺旋反應所必需的。非EB凝膠是檢測旋轉酶活性的理想選擇，超螺旋和松弛DNA形式之間的出色分辨率證明了這一點。

藥物篩選試驗。該試劑盒旨在鑒定IFP和CIC（分別為毒物和抑制劑）。典型的IFP（如氟喹諾酮）會誘導雙鏈DNA斷裂，而原型CIC只會阻止enyzme作用于松弛的DNA（如新生霉素、一些嵌入劑）。因此，IFP（環丙沙星）將導致線性DNA產物的形成，而CIC將阻斷超螺旋活性。使用此套件可以很容易地檢測到這些事件。

艾美捷純化的大腸桿菌DNA旋轉酶藥物篩選試劑盒：

SKU：TG2001GKIT  

類別：藥物篩查試劑盒

標簽：DNA旋轉酶，藥物篩選，EC DNA旋轉酶

純化的大腸桿菌DNA旋轉酶藥物篩選試劑盒包含了純化的細菌（大腸桿菌）DNA旋轉酶，純度達到均一性（基于SDS-PAGE的測定結果超過98%）。旋轉酶是從過表達菌株中制備的，并以A2B2復合體形式提供的純化完整酶。酶的單位濃度根據試劑盒附帶的質量控制數據提供。它還儲存在穩定化緩沖液中[50 mM Tris-Cl pH 7.5，100 mM KCl，2 mM二硫蘇糖醇，1 mM EDTA，50%甘油]。包括底物解鏈DNA（質粒pHOT1）。

EC DNA旋轉酶測定藥物試劑盒內容（100次測定）：

1. 解鏈pHOT1 DNA（50微克）

2. 超螺旋pHOT1 DNA（25微升，含凝膠上樣緩沖液）

3. 線性化pHOT1 DNA（25微升，含凝膠上樣緩沖液）

4. 5倍旋轉酶測定緩沖液（0.6毫升）

5. 稀釋緩沖液（0.6毫升）

6. 10倍凝膠上樣緩沖液（0.3毫升）

7. 10倍蛋白酶K（0.5毫升）

8. 10% SDS（0.3毫升）。

9. 純化DNA旋轉酶（100單位）

10. 環丙沙星10微克/毫升（50微升）

DNA旋轉酶質量控制：

對我們純化的酶進行QC測試：

1. 通過測定線性質粒DNA和線性pUC19 DNA的形成來進行核酸酶污染測試。在10 mM MgCl2存在下，對1微克的連接kDNA或超螺旋pUC19 DNA進行孵化（37°C下4小時）。在這些條件下沒有產生線性DNA或分解產物。

2. A和B亞基純度超過98%，基于SDS-PAGE，并認證為內切核酸酶自由。

3. 注意：在高輸入水平的DNA旋轉酶下，可能會因為自發中止的反應而檢測到少量線性DNA。這很正常，實際上可以作為線性DNA的內部標記。