研究蛋白翻譯后修飾(PTM)，這個Signal-Seeker™試劑盒真好用

翻譯后修飾（PTMs）之于蛋白質，就像七十二變之于孫悟空。翻譯后修飾是對蛋白質的動態、嚴格調節的改變，它通過調節蛋白質的結構、空間定位和互作、從而控制其功能，PTMs主要包括磷酸化、甲基化、乙酰化（Ac）、泛素化（Ub）、SUMO1或2/3等方式，但還有許多其它的，PTMs的錯誤調節與癌癥、心力衰竭、神經和代謝性疾病等的進展有關。

蛋白質發生PTM后，會顯著改變蛋白的理化及構象，從而直接改變蛋白的結合能力與功能。因此,即使蛋白的表達水平沒有改變，但如果翻譯后修飾的狀態發生改變，蛋白的功能也會顯著變化。最終，PTM實現了蛋白質功能的指數級擴增。

PTM對蛋白功能影響是多樣性的，表現在以下三個方面：（1）同一蛋白質，即使只發生一種類型的修飾，也會賦予其多種功能；（2）同一個蛋白的同一種翻譯后修飾，如果發生在不同的氨基酸上，其功能也不同；（3）同一蛋白還可能具有不同的修飾，其功能和參與的生物過程就更為復雜。下圖以intermediate filament protein（IF蛋白）為例：

NatureReviews Molecular Cell Biology 15, 163–177 (2014)

IF蛋白的各種修飾與功能

蛋白修飾及功能的多樣性是維持機體復雜精準調控的基礎，但同時也給研究PTM的科研人員的研究造成了很多的困擾，為什么蛋白質翻譯后修飾的鑒定難度要遠遠高于未發生修飾的蛋白質的鑒定了，主要有以下幾點：

1.發生翻譯后修飾的蛋白質樣本量相對較少

2.發生修飾時形成的共價鍵非常不穩定，且處于動態變化中

3.修飾與未修飾的蛋白及多種修飾形式的蛋白常混合存在

針對于這些困擾，Cytoskeleton公司開發了一款名為 Signal-Seeker™ 的試劑盒，用于分析各種蛋白翻譯后修飾的情況：如賴氨酸乙酰化、泛素化、SUMO化、磷酸化等修飾的鑒定及各種修飾的上調下調表達。

Signal-Seeker™試劑盒使用親和磁珠從任何給定的細胞或組織裂解液中提取并富集修飾蛋白。然后通過標準的Western blot程序分析濃縮蛋白群，最終用戶使用自身的抗體檢測所需的修飾蛋白，Signal-Seeker™試劑盒檢測流程如下圖：

Signal-Seeker™試劑盒的特點和優勢：

1.Signal-Seeker™試劑盒配套相應的抗體，能對任意蛋白的轉錄后修飾進行研究。

2.Signal-Seeker™試劑盒提供通用的裂解過濾系統及定量工具，能輕松從給定的細胞或組織裂解液中提取蛋白并進行總蛋白的定量。

3.Signal-Seeker™親和磁珠，富集效果無與倫比,配合控制磁珠，提供PTM蛋白提供精準定量。

4.Signal-Seeker™親和磁珠可用于捕獲PTM修飾的蛋白，然后用于進行進一步的分析（如Western blot和質譜檢測）。

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5.關鍵的去修飾化抑制劑，防止檢測過程中的去修飾。

6.Signal-Seeker™ kit可以用于研究多重PTM的串擾（例如目標蛋白的泛素化和乙?；?。

7.市面上最全面的PTM套件：包括通用裂解過濾系統、蛋白質定量工具、IP濃縮試劑、洗滌試劑、洗脫試劑、化學發光試劑。

8.試劑盒對內源性PTM研究靈敏度進行了優化，這對于解釋PTM的生理作用至關重要。

Signal-Seeker™試劑盒應用實例：

Signal-Seeker™試劑盒研究Rac1蛋白的單泛素化和多元泛素化

用MG-132預處理Swiss 3T3 細胞，然后添加/不添加CNF1 (CN04)處理3h，用BK161 kit來進行 IP，裂解液上樣量300 μg /次。 Lane 1: 3 μg 未處理的裂解液； Lane 2: Ubiquitin親和磁珠(UBA01) +未處理的裂解液； Lane 3: UBA01 + CN04處理的裂解液； Lane 4: Ubiquitin 對照磁珠(CUB02) +未處理的裂解液； Lane 5: CUB02 + CN04處理的裂解液.

Signal-Seeker™ kit研究PD-L1蛋白的PTM串聯干擾（cross-talk）

EGF處理1h后的細胞能明顯的檢測出PD-L1蛋白同時發生了泛素化（Ub）、酪氨酸磷酸化（pY）、乙酰化(Ac)

PTM串擾：PTM可能在蛋白質功能的調節方面協同作用, 這一過程被稱為 PTM串擾，PTM串擾被認為是一種重要的細胞調節機制，對p53、tau和tubulin等模式蛋白的廣泛研究證實了PTM協同作用是調節這些蛋白功能的前提。

艾美捷科技為您提供Cytoskeleton公司研發的用于各種轉錄后修飾相關的試劑盒、抗體、及親和磁珠:

SUMOylation 1相關產品：

SUMOylation 2/3 相關產品：

磷酸化相關產品：

賴氨酸乙酰化相關產品：

泛素化相關產品：

已發表精彩文章賞析:

Barysch S. et al. 2014. Identification and analysis of endogenous SUMO1 and SUMO2/3 targets in mammalian cells and tissues using monoclonal antibodies. Nat Protoc. 9(4):896-909

Becker J. et al. 2013. Detecting endogenous SUMO targets in mammalian cells and tissues. Nature Struc. & Mol. Biol. 20, 525-531.

Pop, M. et al. 2004. Isotype-specific degradation of Rac activated by the cytotoxic necrotizing factor 1.J. Biol.Chem. 279: 35840-35848

LaBarge et al. 2015. p300 is not required for metabolic adaptation to endurance exercise training. The FASEB Journal article doi: 10.1096/fj.15-281741.

Cytoskeleton公司成立于1993年，專注于生物化學和細胞過程研究中的純化蛋白和便捷試劑盒開發與生產。公司提供藥物篩選、信號轉導、蛋白質翻譯后修飾（PTM）、細胞骨架研究相關的系列試劑盒和產品，尤其以細胞骨架相關研究見長，既能滿足于樣品較少的科學研究，也可以用于小規模篩選研究和高通量大規模篩選研究。目前主要的產品有340余種，其產品主要覆蓋肌動蛋白，微管蛋白，馬達蛋白，小G蛋白，細胞外基質，活細胞成像等相關領域，提供對應的蛋白質，抗體，檢測與分析試劑盒，并且產品線還在不斷的擴大中。此外，公司還提供微管蛋白，肌動蛋白，小G蛋白，GAPs，GEFs等現有產品的藥物篩選服務。

艾美捷科技與國內外優秀的生物試劑供應商保持著密切的合作關系，目前已成為眾多國際知名品牌的中國總代理或一級代理，主要包括：Abbkine、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Alomone Labs、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、PhytoAB、Norgen Biotek、iRegene、StressMarq、Trevigen、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological等，可以在第一時間為用戶提供最前沿的專業資訊、完備的產品及物流服務。

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