10X蛋白穩定溶液：低粘度配方，有效防止酶聚集與凍融失活

一、背景介紹

蛋白質在儲存過程中面臨多種失活風險，包括聚集、降解、構象改變以及與容器表面的非特異性吸附。傳統上，研究者常使用甘油作為蛋白穩定劑，但甘油存在粘度高、移液困難、可能干擾下游實驗等局限性。由艾美捷代理Cell Biolabs公司推出的專利性10X蛋白穩定溶液（貨號：PRB-5210），為蛋白質的長期活性保存提供了一種更優的替代方案。

該穩定溶液以10倍濃縮的緩沖液形式提供，可直接加入目標蛋白溶液中（無需預先稀釋），操作簡便。其設計理念是：通過低分子量組分的協同作用，在不顯著改變溶液體系的前提下，為蛋白質提供穩定的微環境，從而延長儲存壽命。

二、產品核心特性

1. 優異的穩定效果

與傳統方法（如添加甘油）相比，該穩定溶液能夠有效穩定大多數酶及其他蛋白質，防止其在儲存過程中發生聚集。聚集是蛋白質失活的主要機制之一，該溶液通過優化溶劑環境，減少了蛋白質分子間的疏水相互作用，從而維持其單分散狀態。

2. 抵御惡劣環境條件

該溶液能夠保護蛋白質免受苛刻環境條件的沖擊，包括：

高溫波動：即使儲存溫度出現短暫升高（如冰箱故障、反復開門），蛋白質活性仍可得到較好維持。

反復凍融：對于需要多次取用的蛋白樣品，該溶液顯著降低了凍融循環帶來的活性損失。低分子量組分起到類似冷凍保護劑的作用，減少冰晶對蛋白質結構的機械損傷。

3. 易于去除的低分子量組分

與甘油（分子量92 Da）相比，該溶液中的穩定成分均為低分子量化合物。如有需要，可在下游實驗前通過透析或凝膠過濾（脫鹽）輕松去除，不會對后續檢測（如酶活測定、蛋白互作分析、質譜鑒定等）產生干擾。

4. 無毒性與兼容性

該溶液為非毒性配方，使用安全。對于不希望去除穩定劑的下游應用（如某些粗酶反應），可直接使用含穩定劑的蛋白溶液，多數情況下不會抑制后續反應。

三、儲存條件與有效期

儲存溫度：收到產品后應儲存于-80℃。該溫度下穩定溶液本身保持液態或半固態，長期儲存不易降解。

有效期：在正確儲存條件下（-80℃，避免反復凍融），自收貨之日起一年內有效。建議在瓶身標注收貨日期以便追蹤。

分裝建議：為避免多次凍融，建議將穩定溶液分裝為單次使用的小份后再凍存。每份取出使用后，剩余部分應立即返回-80℃。

四、使用方法

操作步驟（共兩步）

步驟1：添加穩定溶液
向目標蛋白溶液中加入1/10體積的10X蛋白穩定溶液。例如：若蛋白溶液體積為900 ?L，則加入100 ?L的10X穩定溶液。輕輕混合，確保充分混勻但避免劇烈振蕩（以免產生氣泡或導致蛋白剪切）。

重要提示：該穩定溶液以10X濃縮液形式提供，請勿預先稀釋。直接加入蛋白溶液即可達到1×工作濃度。預先稀釋會導致穩定劑濃度不足，影響保護效果。

步驟2：儲存
將混合后的蛋白樣品置于適合該蛋白的儲存溫度下，通常為4℃至-80℃之間。該穩定溶液不會改變目標蛋白原有的儲存特性。例如：

某些蛋白質在冷凍溫度下本身不穩定（如某些膜蛋白、大分子復合物），應繼續冷藏（4℃）保存，而非冷凍。

對凍融穩定的蛋白質，可儲存于-20℃或-80℃。

五、結果示例

以下圖表展示了典型結果。以下數據僅供參考，不得用于解釋實際結果。

左圖：辣根過氧化物酶（HRP）的穩定性。將純化的HRP在4°C或98°C下孵育60分鐘，然后在磷酸鹽緩沖液（PBS）、PBS + 50%甘油（PBSG）或PBS + 蛋白質穩定溶液（PSS）的存在下，通過與ELISA底物溶液反應來測試其活性。

右圖：重組Cas9的穩定性。純化的重組Cas9在25°C下，于含有5%甘油的20 mM Tris pH 8、300 mM NaCl、10 mM EDTA的溶液中孵育6天（灰色線），分別用20%甘油（橙色線）、RIPA緩沖液（綠色線）或蛋白穩定溶液（藍色線）處理后，使用Cas9 ELISA試劑盒（貨號PRB-5079）進行檢測。