PNA Bio-KO/KI細胞丨細胞系生成（敲除和敲除）方案

PNA Bio及時提供經濟的細胞系生成（敲除和敲除）。工程細胞系生成過程如下所示：

設計并合成4到8個gRNA載體

通過錯配敏感的核酸酶檢測選擇最有效的工程核酸酶

合成報告載體，用于富集基因編輯事件的細胞

優化轉染協議

設計基因敲入項目的供體載體

通過MACS（磁珠分選）、FACS（流式細胞分選）或海波霉素抗性進行細胞池的選擇（選項：在選定的細胞池中驗證效率）

單細胞克隆

使用T7E1檢測和/或F-PCR對克隆進行篩選

通過TA克隆和測序確認純合子基因敲除

基因敲除細胞系服務：

提供至少兩個獨立的基因敲除（KO）克隆，并確認無支原體污染

時間線：4到7個月

基因敲入細胞系服務：

提供至少兩個獨立的克隆，并確認無支原體污染

包括供體載體設計和合成

時間線：5到7個月

艾美捷PNA Bio 通過FACS確認基因敲除（示例）：

PNA Bio-KO/KI細胞相關文獻：

Enhanced tumor-targeting selectivity by modulating bispecific antibody binding affinity and format valence. Mazor Y et al (2017) Sci Rep 7:40098.

Modeling human epilepsy by TALEN targeting of mouse sodium channel Scn8a. Jones JM & Meisler MH (2014) Genesis 52(2):141-148.

Small molecules enhance CRISPR genome editing in pluripotent stem cells. Yu C et al (2015) Cell Rep 16(2):142-147.

Inhibition of non-homologous end joining increases the efficiency of CRISPR/Cas9-mediated precise [TM: inserted] genome editing. Maruyama T et al (2015) Nat Biotech 33(5):538-542.

ssODN-mediated knock-in with CRISPR-Cas for large genomic regions in zygotes. Yoshimi K et al (2016) Nat Comm 7:10431.

Efficient CRISPR-Cas9-mediated generation of knockin human pluripotent stem cells lacking undesired mutations at the targeted locus. Merkle FT et al (2015) Cell Rep. 11(6):875-883.

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