Bst聚合酶--擴增DNA就用Saphir Bst GreenMaster凍干粉

Bst聚合酶，作為一種特殊的DNA聚合酶，因其獨特的特性和廣泛的應用而備受關注。

基于Bst聚合酶的活性，Saphir-Bst GreenMaster凍干液在恒定溫度（60至65°C）下快速、穩健的擴增DNA。該酶顯示出高轉移置換活性，并產生高達109的擴增因子，這與PCR測定中的約.30個循環相當。Saphir-Bst GreenMaster凍干液允許在10-20分鐘內檢測目標基因。

艾美捷Bst聚合酶/Saphir Bst GreenMaster凍干粉（PCR-398S）含有Saphir Bst聚合酶、dNTPs（去氧核苷酸三磷酸）、反應緩沖液、綠色DNA嵌入染料、添加劑和穩定劑，以凍干形式提供，用于20微升Z終檢測體積的PCR級水。

Bst聚合酶處理方式：

Saphir Bst GreenMaster凍干粉以8管條或96孔板的形式交付，預裝有完整的主混合物，以干燥、室溫穩定的格式。這種凍干粉結合了高性能與使用的便利性和穩定性。無需進行冷凍、解凍或在冰上移液。剩余的少量移液步驟Z小化了錯誤或污染的風險。每個小瓶包含進行20微升LAMP（環介導等溫擴增）檢測所需的所有組分（除了引物和模板）。要執行檢測，只需將小瓶用引物混合物填充并加入DNA模板。這種凍干粉還可以與ROX參照染料一起使用，在兼容ROX信號評估的PCR儀器中。在這種情況下，ROX染料（#PCR-351）應以1倍濃度添加到PCR反應中。

檢測設計：等溫擴增是一種極其敏感的檢測方法，應當注意避免實驗設置區域和設備與之前反應的DNA發生污染。一個可能出現的問題是，由于攜帶污染或非特異性退火引物或引物二聚體形成，導致無模板對照中出現擴增。

引物設計：通常，使用4種不同的引物來識別6個不同的DNA區域，允許特定目標基因的擴增。額外一對引物可以進一步加速擴增，將總檢測時間縮短至10-20分鐘。由于反應序列復雜，手動設計引物可能具有挑戰性。為了簡化設計過程，建議使用引物設計軟件。由于計算機設計的引物在靈敏度和非模板擴增方面可能會有所不同，建議在Z終選擇之前評估2-4組真實引物集。

檢測設置：使用無菌過濾頭進行移液，并在與DNA制備或分析不同的區域進行設置。所有擴增中都應包括無模板對照。首先，準備一個10倍濃度的引物預混合液。其次，設置等溫擴增檢測：

分配主混合物：將引物/探針混合物徹底振蕩（Vortex）以確保均勻性。向每個PCR管或板孔分配20微升(μl)。

? 使用特定的等溫擴增檢測儀器或實時PCR循環儀來運行檢測。

? 將儀器設置為在60至65°C之間的恒定孵化溫度（取決于引物退火溫度）。

? 以1分鐘的間隔測量熒光強度，持續Z多30分鐘。

故障排除：

如果在無模板對照中發生擴增，應復查以下要點：

環境的交叉污染：

使用“DNA Away”溶液清潔設備和區域

用新組分替換試劑庫存和預混物

在非模板擴增發生之前提前停止反應

來自先前反應產物的攜帶污染：

擴增后避免打開反如果需要進行反應后處理，請使用單獨的準備區域和設備

引物引起的非模板擴增：

逐步將孵化溫度提高1-2°C

為靶序列設計一套新的引物