Saphir Bst Turbo GreenMaster凍干粉說明書參考

Saphir-Bst-Turbo-GreenMaster凍干液專為等溫擴增DNA而設計。這種混合物是基于下一代基因增強的Bst聚合酶。該混合物是在恒定溫度（60至65°C）下超快速和穩健擴增DNA的理想選擇。該酶顯示出高鏈置換活性，并產生高達109的擴增因子，這在PCR測定中相當于大約.30個循環。聚合酶比Saphir-Bst聚合酶（#PCR-389/#PCR-388/#PCR-387）快2-3倍，并且允許在5-10分鐘內檢測靶基因。

艾美捷Saphir Bst Turbo GreenMaster凍干粉（PCR-395S）包含Saphir Bst Turbo 聚合酶、dNTPs（脫氧核苷酸三磷酸）、反應緩沖液、綠色DNA嵌入染料、添加劑和穩定劑。

PCR級水處理：

Saphir Bst Turbo GreenMaster凍干粉是以8管條狀或預裝有完整母液的96孔板形式交付的，干燥、室溫下穩定。這種凍干粉結合了高性能、使用便利性和穩定性。無需冷凍、解凍或在冰上移液。剩余的少量移液步驟最小化了錯誤或污染的風險。每個小瓶包含了進行20 μl LAMP檢測所需的所有組分（除了引物和模板）。要執行檢測，只需向小瓶中加入引物混合物并添加DNA模板。這種凍干粉還可以與ROX參考染料一起使用，在與ROX信號評估兼容的PCR儀器中。在這種情況下，應將ROX染料（#PCR-351）以1倍濃度添加到PCR反應中。

檢測設計：

等溫擴增是一種極其敏感的檢測方法，應注意避免設置區域和設備與之前反應的DNA發生污染。一個可能出現的問題是無模板對照中發生擴增，這可能是由于攜帶污染或非特異性退火引物或引物二聚體形成造成的。

引物設計：

通常，使用4種不同的引物來識別6個不同的DNA區域，允許特異性擴增目標基因。增加一對引物可以進一步加速擴增，將總檢測時間縮短至10-20分鐘。

手動設計引物可能因反應序列復雜而具有挑戰性。為了簡化設計過程，建議使用引物設計軟件。

由于計算機設計的引物的靈敏度和非模板擴增可能會有所不同，建議在選定最終引物集之前評估2-4組真實引物集。

檢測設置：

使用帶無菌過濾頭的移液管，并在與DNA制備或分析不同的區域進行設置。所有擴增中都應包括無模板對照。首先，準備一個10倍濃度的引物預混液。其次，設置等溫擴增檢測：

分配母液

徹底渦旋混合引物/探針混合物以確保均勻性。向每個PCR管或板孔分配20 μl。

? 使用特定的等溫擴增檢測儀器或實時PCR循環儀來運行檢測。

? 將儀器設置為在60至65°C之間的恒定孵化溫度（取決于引物退火溫度）。

? 以1分鐘的間隔測量熒光強度，持續Z多30分鐘。

Saphir Bst Turbo GreenMaster凍干粉相關產品：

Saphir Bst Turbo Polymerase, #PCR-390

Saphir Bst Turbo GreenMaster, #PCR-393

Saphir Bst Turbo GreenMaster high ROX, #PCR-394