ProbesMaster凍干制劑/qPCR探針主凍干物--易于操作且功能強大

qPCR ProbesMaster凍干液用于使用基于DNA探針的檢測對DNA樣本進行實時定量分析。建議將凍干物與雙重標記熒光探針一起使用，例如TaqMan, 分子信標或FRET探針。它提供了一種易于操作且功能強大的工具，可在高達6個數量級的寬動態范圍內以極高的靈敏度和精度對樣本DNA進行定量。凍干物在單個珠粒中包含qPCR所需的所有試劑（模板、引物和標記的熒光探針除外）。基于優化的熱啟動聚合酶的混合物的高特異性和敏感性。其活性在環境溫度下被阻斷，并在初始變性開始時自動開啟。在PCR設置過程中，熱激活可防止非特異性氰基化引物的延伸和引物二聚體在低溫下形成。

艾美捷ProbesMaster凍干制劑/qPCR探針主凍干物（PCR-156S）：

qPCR探針主凍干粉：包含抗體阻斷的熱啟動聚合酶、dATP、dCTP、dGTP、dTTP、KCl、(NH4)2SO4、MgCl2、添加劑和穩定劑以及PCR級水。

處理：qPCR主凍干粉以PCR反應管條或96孔板的形式交付，預裝有完整的qPCR主混合物，以干燥、室溫下穩定的格式。這種凍干粉結合了高性能與使用的便利性和穩定性。無需進行冷凍、解凍或在冰上移液。剩余的少量移液步驟Z小化了錯誤或污染的風險。每個小瓶包含進行20 ?l實時PCR檢測所需的所有組分（除了引物、雙標記探針和模板）。要執行PCR，只需將小瓶用引物/探針預混液填充并加入DNA模板。這種凍干粉還可以與ROX參照染料一起使用，在兼容ROX信號評估的PCR儀器中。在這種情況下，ROX染料（#PCR-351）應以1倍濃度添加到PCR反應中。

雙標記DNA探針：基于雙標記DNA探針的實時PCR技術提供了一個高靈敏度和高特異性的PCR系統，具有多重能力。它需要兩個標準的PCR引物和能夠與擴增子內部部分雜交的DNA探針。雙標記DNA探針的序列應避免二級結構和引物-二聚體形成。

引物/探針混合物的制備：在定量PCR反應中推薦制備引物/探針預混液，以減少移液誤差。使用無菌過濾頭進行移液，并盡量減少標記的DNA探針暴露在光線下的時間。應在與DNA制備或分析不同的區域進行設置。在所有擴增中應包括無模板對照（NTC）。

推薦的PCR檢測凍干制劑：

1) 每個引物的Z佳濃度可能從100到500納摩爾(nM)不等。

2) 要獲得Z佳結果，可能需要對DNA探針的濃度進行滴定，范圍在50到800納摩爾(nM)之間。

3) 退火溫度取決于所使用的引物和DNA探針的熔解溫度。

4) 延伸時間取決于擴增子的長度。建議對于Z長500堿基對(bp)的片段，使用1分鐘的時間。

分配主混合物：將引物/探針混合物徹底振蕩（Vortex）以確保均勻性。向每個PCR管或板孔分配15微升(?l)。

添加模板DNA：向每個反應容器中加入5微升(?l)的模板DNA（或無模板對照），并蓋緊或封住管子/板。每個反應的最終濃度不要超過10納克(ng) DNA。在循環前應對管子或板進行離心，以去除可能的氣泡。