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特色產品ALFA肽樹脂是一種高親和力樹脂,可用于高效、純凈地純化與NbALFA(單域抗體抗ALFA)融合的蛋白質。該樹脂采用共價固定在4%瓊脂糖或磁性瓊脂糖微珠上的ALFA樣肽段設計而成。
ALFA系統基于ALFA標簽(一種高度通用的表位標簽,其核心序列為SRLEEELRRRLTE)及其高親和力結合伴侶NbALFA(單域抗體抗ALFA)。NbALFA是一種單域抗體(sdAb),解離常數約為26 pM。
ALFA肽樹脂是專為選擇性純化與NbALFA融合的蛋白質而設計的親和樹脂。該樹脂提供兩種形式:基于4%交聯瓊脂糖或磁性瓊脂糖。兩種形式均采用固定的ALFA樣肽段,能夠高效、高特異性地捕獲NbALFA及NbALFA標記的目的蛋白(POI)。洗脫在溫和酸性條件(pH 3.0)下進行,通??杀苊馐褂?nbsp;harsh 變性劑或還原劑,從而保留敏感蛋白質的天然構象和功能。這使得ALFA肽樹脂特別適用于需要功能完整、結構完整的蛋白質的應用。
兩種ALFA肽樹脂變體在結合和洗滌過程中與多種緩沖液配方兼容,并可耐受高濃度的常見去污劑和還原劑(詳見實驗方案),為定制化純化流程提供了靈活性。由于ALFA樣肽段通過共價連接,該樹脂可承受多次再生循環和 harsh 的原位清洗(CIP)程序,而不會顯著降低性能。
艾美捷ALFA肽樹脂:
貨號:N1530
生產來源:合成肽
應用:免疫沉淀(IP)
結合容量:結合容量取決于目標蛋白的流體動力學特性。例如:對NbALFA(14 kDa)的結合容量約為500 ?M(約7 mg/mL);對NbALFA–Halo融合蛋白(48 kDa)的結合容量約為400 ?M(約19 mg/mL)。
靶點:NbALFA
特異性:與NbALFA(單域抗體抗ALFA)特異性結合
制劑:50%漿液(PBS中含20%乙醇)
運輸條件:環境溫度
儲存條件:4°C保存,有效期12個月。請勿冷凍!
注意:僅限體外研究使用。無毒、無危險、無傳染性。

使用ALFA肽樹脂(貨號N1530)對NbALFA(單域抗體抗ALFA)進行親和純化的示例:將2.5 μM NbALFA加入大腸桿菌裂解液后,在室溫下兩次過柱0.5 mL ALFA肽樹脂。結合后,用PBS洗滌樹脂,并分別在單獨實驗中用pH 2.2(A)、pH 3.0(B)或pH 5.0(C)的檸檬酸鈉緩沖液以五個柱體積進行流動洗脫。剩余結合蛋白用SDS樣品緩沖液洗脫。通過SDS-PAGE和考馬斯亮藍染色對指定餾分進行分析。pH 5.0洗餾分作為陰性對照。

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