中文說明書：HybriDetect 2T：MGHD 21

用于同時檢測用FITC、生物素和地高辛標記的兩種不同分析物（蛋白質、基因組擴增產物）的通用側流式試紙條

REF: MGHD 2 1

規格：100 Texts

注意：重要更改在邊緣處用虛線表示。在說明書的最后，您將找到一張列出引入更改原因的表格。

一、符號解釋

二、警告和注意事項

1.所有試劑應在原始容器中存放在 2-8 ℃的環境中。

2.使用前，將所有試劑恢復至室溫（18-28 ℃）。

3.必須遵守所有組分的有效期限。

4.保護檢測條免受濕氣影響；容器必須始終密封。

5.只接觸和標記檢測條的箔紙覆蓋區域（標記區域）。

6.廢棄物的處理必須按照當地的法規進行。

7.檢測緩沖液含有抗微生物試劑，因此避免與皮膚和/或黏膜接觸。

8.適用于專業用戶。

三、預期用途

HybriDetect 2T是一種通用側流式試紙條，用于同時檢測用FITC、生物素和地高辛標記的兩種不同分析物（蛋白質、基因組擴增產物）。  

它是一個開發平臺。它是一個開發平臺。

該測試僅供研究使用，不用于診斷目的。

四、提供的材料、儲存和穩定性

可根據要求或從公司網站（www.milenia-biotec.de）獲取材料安全數據表（MSDS）。

五、所需材料（不包括在內）

1、移液管

2、移液管尖（含有PCR的保護性過濾器）

3、反應管或96孔微孔板

六、必要的開發工作-開發平臺

開發一個含有兩種不同標記的探針用于分析物的溶液。以下條件是必要的：

1）溶液A：探針必須標記為：

·FITC（異硫氰酸熒光素）或FAM（羧基熒光素）

·生物素

2）溶液B：探針必須標記為：

·FITC（異硫氰酸熒光素）或FAM（羧基熒光素）

·地高辛

3）在檢測過程中使用約100 uL的液體（樣品和分析物特異性溶液A和B）。

4）提供的緩沖液（MGCBB）可用作這些分析物特異性溶液的基礎緩沖液。

使用示例：

20微升樣品和80微升特定于分析物的溶液，孵育時間為5分鐘。

注意：

1、體積、特定于分析物的溶液和孵育時間是個體測試開發的一部分。  

2、關于基因組擴增物的檢測的基本步驟在第7頁上解釋：“PCR產物的測定性能”。一個擴增產物應該被生物素化，特異性雜交探針應該標記為FITC。第二個擴增產物應該標記有地高辛，特異性雜交探針應該標記為FITC?？梢允褂酶鞣N擴增方法（PCR或等溫擴增，如LAMP或RPA）。

七、方法：

Milenia HybriDetect 2T是一種即用型通用試紙條（浸漬棒），基于使用金顆粒的側流技術。該試紙條旨在開發用于同時檢測兩種不同分析物（如蛋白質、抗體或基因擴增）的定性或定量快速測試系統。用戶需要開發兩種特異性分析物溶液。溶液A：含有用FITC標記的第一探針（例如抗體、抗原、特異性探針）和用生物素標記的第二探針（例如抗體、引物）。溶液B：同樣含有用FITC標記的第一探針（例如抗體、抗原、特異性探針）和用地高辛標記的第二探針（例如抗體、引物）（請參閱第5頁的“通用測試原理”）。

待測樣品與開發的分析物特異性溶液混合后，將試紙條放入該溶液中。

用FITC和生物素標記的分析物A復合物首先與試紙條的樣品施加區域中標記有金的FITC特異性抗體結合。用FITC和地高辛標記的分析物B復合物也與試紙條的該區域結合。毛細力使金復合物A和B擴散到分析膜上。只有被捕獲的金顆粒分析物在溢出相應測試帶（測試帶A-分析物A，測試帶B-分析物B）時，與固定的生物素配體分子結合，并隨時間生成紅藍色帶狀。未被捕獲的金顆粒流過控制帶，并被物種特異性抗體固定在那里。隨著孵育時間的增加，會形成一個顏色濃烈的控制帶。

八、測試原理 - 基因擴增物檢測

測試原理 - 蛋白質檢測

控制帶試紙（Control Band Dipstick）

無論如何，控制帶必須可見！

它是一個控制功能，不能用來評估測試帶結果的質量。如果孵育期后控制帶不可見，結果無效！必須使用新的試紙重復測試！

十、PCR產物測定性能

1. 從容器中取出所需數量的試紙條并標記它們。

2. 對于每個待分析的樣品，將100 uL HybriDetect測定緩沖液或個別開發的緩沖液移液到反應管或微孔板的孔中。

3. 直接將5-10 uL的雜交產物移液到樣品施加區域，或者選擇將5-10 uL的雜交產物加入反應管/孔中的溶液中。

4. 將試紙條的樣品施加區域放入溶液中，并以直立的姿勢孵育，例如5-15分鐘。

5. 孵育結束后，將試紙條從測定溶液中取出，并立即解讀測試結果。

注意：

如果需要更高的分析靈敏度，增加PCR產物的體積可能會有所幫助。體積、特定于分析物的溶液和孵育時間始終是個別測試開發的一部分。

十一、測定性能 "RPA產物"

1. 從容器中取出所需數量的試紙條并標記它們。

2. 對于每個待分析的樣品，將80 uL HybriDetect測定緩沖液（MGCBB）移液至反應管或微孔板的孔中。

3. 在RPA反應后，用HybriDetect測定緩沖液（MGCBB）稀釋RPA反應混合物1/50或1/25（用于更高的靈敏度），并直接加載10 ul至樣品施加區域。

4. 將已加載的試紙條的樣品施加區域放入準備好的溶液中（參見第2點），并以直立姿勢孵育，例如5-15分鐘。

孵育結束后，將試紙條從測定溶液中取出，并解讀測試結果。

十二、結果解讀

應用內部PCR控制：

雖然生物素標記的擴增物A主要用于檢測特定目標序列，但地高辛標記的擴增物B被提供作為內部PCR擴增控制。

十三、PCR故障排除

十四、PCR測定的靈敏度

Milenia HybriDetect 2T的分析靈敏度相當于瓊脂糖凝膠電泳和隨后用溴化乙錠染色。不受PCR產物大小和擴增循環數的影響，可以檢測到低至5 pg的DNA。

十五、文獻參考

Dai T, et al, Frontiers in Microbiology (2019); 10:1884.

Yang Y, et al, Virology Journal (2017), 14(1), 1–10.

Qi Y, et al, PLoS ONE (2018), 13(11).

Ahmed F A, et al, Scientific Reports (2018), 8(1).

Wu L, Parasites & Vectors (2019). 12(1),

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