Cell Biolabs 鳥嘌呤測定試劑盒(熒光法)檢測原理及樣本測定方案

鳥嘌呤是脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）中四種常見核苷酸堿基之一。

在雙鏈DNA中，鳥嘌呤與另一條鏈上的胞嘧啶形成堿基對，而RNA鏈也可以折疊成二級結構，例如通過相同的鳥嘌呤/胞嘧啶堿基配對穩定的發夾環。這種結合通過三個氫鍵實現。細胞中的鳥嘌呤由鳥苷酸磷酸化酶從鳥苷和磷酸合成。

鳥嘌呤在生物體內有多種作用，包括偽裝、展示和視覺功能。此外，一些兩棲動物、蜘蛛和蝎子會將氨轉化為鳥嘌呤，后者可以以極少量的水分流失排出體外。有趣的是，根據NASA對含有鳥嘌呤和其他核苷酸堿基的隕石的研究，鳥嘌呤可以在地球以外的環境中形成。

Cell Biolabs的鳥嘌呤檢測試劑盒是一種簡單的比色法測定方法，可在96孔微孔板格式中測量生物樣本中的總鳥嘌呤含量。

每套試劑盒提供的試劑足以進行多達100次測定，包括空白、鳥嘌呤標準品和未知樣本。樣本中的鳥嘌呤濃度通過與已知濃度的鳥嘌呤標準品進行比較來確定。試劑盒的檢測靈敏度限為3.1 ?M鳥嘌呤。

*注意：每個樣本重復需要2次測定，一次加入鳥嘌呤脫氨酶（+GDA），一次不加（-GDA）。鳥嘌呤的含量通過兩個孔的吸光度（OD）讀數差異計算得出。

作為Cell Biolabs全國總代理，艾美捷科技強烈推薦Cell Biolabs熱銷產品鳥嘌呤測定試劑盒(熒光法)。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

鳥嘌呤測定試劑盒(熒光法)檢測原理：

該試劑盒用于測量生物樣本中的總鳥嘌呤含量。鳥嘌呤在鳥嘌呤脫氨酶的作用下轉化為黃嘌呤，隨后黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶（XO）的作用下轉化為尿酸和過氧化氫。生成的過氧化氫通過一種高特異性的比色探針進行檢測。辣根過氧化物酶催化探針與過氧化氫之間的反應，兩者以1:1的比例結合。樣本與已知濃度的鳥嘌呤標準品在96孔微孔板格式中進行比較。樣本和標準品在孵育15分鐘后，使用標準96孔比色板讀取器進行讀取。

試劑盒組成（藍冰運輸）：

鳥嘌呤標準品（部件號51471C）：一支50 ?L的20 mM溶液。

10X測定緩沖液（部件號268002）：一瓶25 mL的500 mM磷酸鈉緩沖液，pH 7.4。

比色探針（部件號50222C）：一支50 ?L的DMSO溶液。

辣根過氧化物酶（HRP，部件號234402-T）：一支10 ?L的100 U/mL溶液，溶于甘油中。

50X鳥嘌呤脫氨酶（部件號51472D）：一支100 ?L管。

黃嘌呤氧化酶（部件號50904D）：一支100 ?L的2.5 U/mL溶液。

*注：酶的單位定義為在pH 7.5、25°C條件下，每分鐘將1.0 ?mol黃嘌呤轉化為尿酸的酶量。使用次黃嘌呤作為底物時，可獲得約50%的活性。

相關產品：

MET-5014：NAD?/NADH檢測試劑盒（比色法）

MET-5150：黃嘌呤/次黃嘌呤檢測試劑盒（熒光法）

STA-380：全基因組DNA甲基化ELISA試劑盒（比色法）

MET-5070：甘氨酸檢測試劑盒（熒光法）

MET-5086：氨檢測試劑盒（比色法）

未提供材料：

磷酸鹽緩沖液（PBS）

標準96孔透明微孔板和/或透明細胞培養微孔板

儲存

收到試劑盒后，將10X測定緩沖液置于室溫保存，其余組分保存于-20℃。比色探針對光敏感，需妥善保存。避免多次凍融循環。

*注：首次解凍100X鳥嘌呤脫氨酶或黃嘌呤氧化酶后，建議分裝成小份量并保存于-20℃。

結果示例：

下圖展示了典型的鳥嘌呤檢測試劑盒（比色法）結果。以下數據僅供參考，不應用于解釋或計算實際樣本結果。

圖：鳥嘌呤標準曲線。

文獻參考：

1. Shafer RH (1997). Prog. Nuc. Acid. Res. Mol. Biol. 59: 55-94

2. Votyakova TV, and Reynolds IJ (2001) Neurochem. 79:266.

3. Gur D, Palmer BA, Weiner, S, and Addadi L (2017) Adv. Func. Mat. 27:1-13

4. Callahan, Smith KE, Cleaves HJ, Ruzica J, Stern JC, Glavin DP, House CH, and Dworkin JP (2011)

Proc Natl Acad Sci. 108: 13995-13998.

Cell Biolabs公司位于美國加利福尼亞州南部重要的工業城市圣迭戈（San Diego），是有名的細胞學試劑品牌，作為前沿的細胞學分析檢測試劑盒生產商，為生物技術和研究類客戶提供好的基于細胞功能研究以及疾病等方面的高端產品和技術服務。產品主要涵蓋細胞研究、細胞信號通路和蛋白質生物學、代謝研究、病原體和毒素、干細胞研究等領域。全球眾多大學、政府研究機構、生物、制藥企業的科研實驗室均在使用Cell Biolabs的產品。