IgE(猴)ELISA試劑盒：精準定量檢測猴血清中的IgE

IgE是血清中含量最少的免疫球蛋白，通常含量約為100 ng/mL。它參與過敏反應，與嗜堿性粒細胞和肥大細胞上的Fc受體結合?？乖cIgE的后續結合會觸發組胺和其他血管活性胺的釋放。在哮喘、濕疹、鼻炎和寄生蟲感染中，IgE水平會升高。

IgE（猴）ELISA試劑盒用于測量獼猴和食蟹猴血清中的IgE。該測定使用兩種IgE單克隆抗體，一種用于固相固定（微孔板孔）。另一種與HRP結合，用于檢測。

艾美捷IgE(猴)ELISA試劑盒：

貨號：KA2450

校準范圍：5至160 ng/mL

適用樣本：血清

樣本體積：100 ?L（稀釋樣本）

標記：HRP結合物

檢測方法：比色法

監管狀態：僅供研究使用（RUO）

反應性：猴

應用：定量

儲存說明：將凍干標準品儲存于-20℃。將所有其他組分儲存于4℃。

僅供研究使用（RUO）

測定原理：

稀釋的血清樣本和標準品在微孔板孔中與HRP結合物一起孵育一小時。如果存在IgE分子，它們會被固定和檢測抗體夾在中間。然后洗滌孔。加入TMB試劑并孵育20分鐘。如果存在IgE，這將導致藍色顏色的產生。通過加入終止液停止顏色發展，顏色變為黃色。在450 nm處測量吸光度。樣本中IgE的濃度與吸光度成正比，并從標準曲線上得出。

試劑準備：

? 稀釋液準備

提供的稀釋液為10倍濃縮液。使用前，估計您的測定所需的最終稀釋液體積，并將一份（1）體積的10倍濃縮液與九份（9）體積的蒸餾水或去離子水稀釋。

? 洗滌液準備

提供的洗滌液為20倍濃縮液。使用前，將瓶中內容物（50 mL）與950 mL蒸餾水或去離子水稀釋。

? 標準品準備

用1.0 mL蒸餾水或去離子水復溶IgE儲備液（復溶后的儲備液在4℃下穩定一天，但如需日后使用，應分裝并冷凍于-20℃）。

標記6個聚丙烯或玻璃管，分別為160、80、40、20、10和5 ng/mL。

在標記為160 ng/mL的管中，加入IgE儲備瓶標簽上詳細說明的稀釋液體積。然后加入指示體積的IgE儲備液并輕輕混合。這提供了160 ng/mL的標準品。

向標記為80、40、20、10和5 ng/mL的管中各加入250 μL稀釋液。

通過將160 ng/mL標準品250 μL與標記為80 ng/mL的管中的250 μL稀釋液混合稀釋，制備80 ng/mL標準品。

同樣通過兩倍連續稀釋法制備剩余的標準品。

樣本準備：

我們發現獼猴和食蟹猴血清中IgE濃度范圍從小于25 ng/mL到1000 ng/mL。最佳稀釋度應通過實驗確定，但我們建議初步以10倍稀釋度測試樣本。為避免基質效應，不要使用小于10倍（即5倍）的樣本稀釋度。

測定步驟：

在支架中固定所需數量的涂覆孔。

向孔中加入100 ?L HRP結合物。

向孔中加入100 ?L標準品和稀釋樣本（我們建議樣本進行雙份測試）。

在軌道式微孔板振蕩器上以150 rpm和25℃孵育一小時。

吸出微孔板孔中的內容物，并使用平板洗滌器（400 ?L/孔）用1倍洗滌液洗滌孔5次。整個洗滌過程應盡快完成。

如有必要，將孔用力敲擊在吸水紙或紙巾上以去除殘留洗滌緩沖液。

向每個孔中加入100 ?L TMB試劑。

在室溫（25℃）下，于軌道式微孔板振蕩器上以100-150 rpm輕輕混合20分鐘。

向每個孔中加入100 ?L終止液以停止反應。

輕輕混合。確保所有藍色完全變為黃色非常重要。

在5分鐘內用微孔板讀數器在450 nm處測量吸光度。

標準曲線僅用于說明，不應用于計算未知量。每次進行測定時，應生成標準曲線。