IgM(狗)ELISA試劑盒試劑準備&結果計算方案

IgM（狗）ELISA試劑盒是一種高靈敏度的雙位點酶聯免疫測定法（ELISA），用于測量IgM狗的生物樣本。

艾美捷IgM(狗)ELISA試劑盒：

貨號：KA1958

校準范圍：25至800納克/毫升

適用樣本：血漿、血清。

樣本體積：100微升

標記：HRP偶聯

檢測方法：比色法

法規狀態：僅限研究使用（RUO）

反應性：犬

應用：定量

儲存說明：將試劑盒儲存在4℃

僅限研究使用（RUO）

CIgM(狗)ELISA試劑盒測定原理：

在此測定中，樣本中的IgM與已吸附在聚苯乙烯微量滴定板孔表面的抗IgM抗體發生反應。通過洗滌去除未結合的蛋白質后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）偶聯的抗IgM抗體。這些酶標記的抗體與先前結合的IgM形成復合物。經過另一次洗滌步驟后，通過加入顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯苯胺（TMB）來測定與免疫吸附劑結合的酶。結合的酶的量與測試樣本中IgM的濃度成正比；因此，450納米處的吸光度是測試樣本中IgM濃度的量度?？梢酝ㄟ^從校準標準品構建的校準曲線上插值來確定測試樣本中IgM的量，并校正樣本稀釋。

需要但未提供的材料：

? 精密移液器（2微升至100微升），用于制備和分發稀釋液

? 試管

? 噴霧瓶或微量滴定板洗滌/抽吸器

? 蒸餾水或去離子水

? 微量滴定板讀數器

? 用于制備試劑和緩沖溶液的各種玻璃器皿

? 用于樣本收集的離心機

? 用于血漿收集的抗凝劑

? 計時器

使用注意事項：

在使用本產品之前，請完整閱讀本協議。

僅限研究使用，不用于診斷目的。不用于人類和動物食用。僅限體外使用

? 程序限制

當完全理解包裝插頁說明中的信息，并遵循良好的實驗室實踐時，將獲得可靠和可重復的結果。可能影響測定性能的因素包括儀器功能、玻璃器皿的清潔度、蒸餾水或去離子水的質量以及試劑和樣本移液、洗滌技術、孵育時間或溫度的準確性。不要將不同批號或來源的試劑混合或替換。

試劑準備：

在使用前將所有試劑平衡至室溫（16℃至25℃）。

? 稀釋液濃縮液

提供的稀釋液為5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水稀釋1/5（1份緩沖液濃縮液，4份dH?O）。

? 洗滌液濃縮液

提供的洗滌液為20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水稀釋1/20（1份緩沖液濃縮液，19份dH?O）。當儲存溫度較低時，濃縮液中可能會形成結晶。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35℃可以溶解結晶。

? 酶-抗體偶聯物

通過向每個測試條的1X稀釋液中加入10微升酶-抗體偶聯物來計算每個微量滴定板測試條所需的工作偶聯液量（每個用于測試的測試條加入990微升）。立即稀釋并使用，避免光照。均勻混合，但要輕柔。避免起泡。

? 預包被的ELISA微量滴定板

直接使用。打開鋁箔袋并取出板。將不會用于測定的測試條和孔放回袋中，并與干燥劑一起重新密封。

? 犬IgM校準品

根據特定批次的分析證書進行準備。

結果計算：

從每個樣本的測試值中減去平均背景值（標準零的平均吸光度讀數）。

平均每個標準的重復讀數，并使用結果構建標準曲線。通過使用能夠生成四參數邏輯曲線擬合的計算機軟件來處理數據來構建標準曲線。也可以使用二階多項式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們對數據的擬合精度較低。

從標準曲線上插值測試樣本值。校正血清稀釋因子，以確定原始樣本中IgM的濃度。