Jackson ImmunoResearch有關抗體的具體問題分析（FAQ）

針對Jackson ImmunoResearch抗體的一些具體問題，目前艾美捷總結了五點，如下：

1. 西方印跡（Western blot）

如何避免檢測免疫沉淀（IP）抗體的重鏈？

Jackson ImmunoResearch提供針對IgG輕鏈的特異性抗體，以避免檢測IP抗體的重鏈（50 kDa）。

如何避免檢測免疫沉淀（IP）抗體的輕鏈？

可以使用針對IgG Fc片段的特異性抗體來避免檢測IP抗體的輕鏈（25 kDa）。然而，樣本還原通常會導致少量降解的重鏈在25 kDa處產生，必須使用FabuLight?抗體來阻斷這些片段的信號。

2. 酶聯免疫吸附測定（ELISA）

推薦的涂層條件是什么？

為確保徹底涂層，Jackson ImmunoResearch建議使用10微克/毫升的蛋白質在高pH緩沖液中，例如0.1 M Na2CO3/NaHCO3，pH 9.6。

3. 免疫組織/細胞化學（IHC/ICC）

在小鼠組織/細胞上可視化小鼠來源的一級抗體需要哪些試劑？

在小鼠對小鼠染色中，可以使用單價Fab片段來阻斷內源性免疫球蛋白的不需要信號。

有哪些試劑可以用來提高熒光探針的光穩定性？

許多商業化的封埋介質含有抗褪色試劑。實驗室也可以自行準備含有丙酸丙酯的抗褪色封埋介質。

在選擇Cy2的封埋介質時應該注意什么？

Cy2與p-苯二胺不兼容，這是一種抗褪色試劑，存在于一些商業封埋介質中，如Vectashield。確保Cy2封埋介質中不含p-苯二胺。

在永久封埋介質中最穩定的熒光團是什么？

青色素已被證明在塑料封埋介質的非極性環境中具有優越的亮度和光穩定性。

在選擇多重標記協議的熒光團時應該考慮什么？

在選擇多重標記的熒光團時，審查儀器的能力（可用的激發波長和發射濾光片）。窄帶通濾光片有助于從具有重疊發射光譜的熒光團中分離信號。網上有工具可以幫助選擇熒光染料組合，并與合適的濾光片匹配。

成功的多重標記還需要使用不互相交叉反應的二級抗體，不對的一級抗體，或內源性組織免疫球蛋白。

4. 流式細胞術

我應該為流式細胞術選擇哪種二級抗體格式？

在免疫測定中使用多克隆二級抗體綴合物通常比直接綴合的一級抗體提供更強的信號，因為每個一級抗體可以結合多個二級抗體。

F(ab')2抗體在流式細胞術分析中是理想的選擇，因為Fc受體的存在可能會導致背景，因為它們會結合整個IgG抗體的Fc區域。F(ab')2抗體的結合特性與整個分子相同。

對于復雜的標記組合，如果希望將預標記的一級抗體混合在單一混合物中，FabuLights?（單價Fab抗Fc抗體）非常適合。

在小鼠細胞上可視化小鼠來源的一級抗體需要哪些試劑？

使用直接標記的一級抗體是避免檢測內源性免疫球蛋白的最佳方法，當一級抗體與實驗樣本來自同一物種時。

如果需要二級抗體進行檢測，可以使用單價Fab片段來阻斷內源性免疫球蛋白的不需要信號。

什么是同型對照，它如何使用？

同型對照是一種陰性對照，用于驗證一級或二級抗體的特異性結合。同型對照與實驗抗體屬于同一類別或亞類，但不是針對抗原目標的。同型對照可以從實驗抗體的宿主物種的正常血清中純化；或者在單克隆抗體的情況下，可以是針對不相關抗原的同一亞類的單克隆抗體。未標記抗體的同型對照是未標記的，標記抗體的對照與實驗抗體使用相同的報告分子（熒光團或生物素）進行標記。

在流式細胞術中了解更多關于同型對照的信息。

在選擇熒光探針時應考慮什么？

在選擇流式細胞術的熒光團時，審查儀器上可用的熒光通道。在線工具方便幫助選擇熒光染料組合。

5. 電子顯微鏡

各種應用推薦使用什么大小的金顆粒？

Jackson ImmunoResearch提供4、6、12和18納米大小的免疫金復合物。對于許多應用來說，顆粒大小并不關鍵，試劑可以互換。

6、12和18納米大小推薦用于透射（TEM）和掃描（SEM）電子顯微鏡中的多重標記協議。這些復合物經過密度梯度處理，確保顆粒大小的均勻性。4納米大小可以用于電子顯微鏡中的單一標記，但可能包含不均勻的顆粒。

4納米免疫金復合物提供了最佳的組織穿透力，通常更受光顯微鏡（LM）的青睞。大尺寸的也適合LM。所有免疫金試劑都需要銀增強才能用于LM。

應該如何儲存膠體金復合物？

將液態膠體金復合物（6、12和18納米）儲存在-20°C。將凍干金復合物（4納米）儲存在4°C，直到它們重新水化。

何時應在協議中包含銀增強？

需要銀增強來觀察光顯微鏡下的免疫金染色。請按照Jackson ImmunoResearch的銀增強協議操作，或使用商業化試劑。