MiTeGen-JBS晶體脫水和打撈試劑盒使用方法

自蛋白質晶體學的早期以來，脫水一直被用作誘導蛋白質晶體結構變化的工具。

艾美捷MiTeGen-JBS晶體脫水和打撈試劑盒：

產品型號：M-CO-

分類：室溫篩查，入門套件

自從蛋白質晶體學誕生之初，脫水就被用作誘導蛋白晶體結構變化的工具。盡管被忽視，脫水仍然是一個強大的工具，用于改善或至少改變蛋白晶體的衍射特性。

脫水移除了多余的溶劑，緊縮了蛋白質分子的堆積，并減小了溶劑通道的大小。因此，有時它可以提高晶體的有序性并改善衍射分辨率。

通過移除多余的溶劑，脫水可以使快速冷凍更容易成功，特別是對于那些初始溶劑含量較高的晶體。

當充分脫水時，許多蛋白晶體會經歷結構轉變，產生可能在晶體生長過程中難以或無法直接實現的替代晶體堆積。

在所有晶體后的處理中，脫水已被證明是提高晶體衍射特性最有效的方法。當然，脫水也經常嚴重降低晶體衍射，但（令人驚訝的是！）通過重新水合，通常可以完全恢復原始的晶體有序性。

脫水鹽和晶體脫水與搶救試劑盒被設計為一種簡單、可控和可靠的方法，用于脫水蛋白晶體，從而提供一種有效的工具來改變/改善它們的衍射特性。

MiTeGen-JBS晶體脫水和打撈試劑盒包含12種飽和鹽溶液，每種1毫升，產生的相對濕度范圍在22.5至97.3%之間。

MiTeGen-JBS晶體脫水和打撈試劑盒使用方法：

為了使晶體脫水，將10-20?l的鹽溶液注入MicroRT毛細管。使用凝膠加載移液管尖端將液體一直向下注入管的密封端。這將使晶體和溶液很好地分離。將MicroMount、MicroLoop或其他安裝環插入測角儀底座，然后收獲水晶。將MicroRT毛細管拉到晶體上，然后拉到測角儀底座上。顯微鏡或低倍放大鏡可以更容易地引導毛細管穿過晶體。在測角儀底座上涂抹少量油或油脂可以改善毛細管的密封，但一般來說不是必需的。在X射線檢查之前，讓晶體與鹽溶液平衡30分鐘（對于100?m或更小的晶體）至2小時（對于~500?m的晶體）。

圖1：脫水鹽的使用

脫水策略：

要快速確定是否存在能夠改善衍射的相對濕度，選擇一種給出相對較低最終相對濕度的鹽溶液——在60-75%的范圍內。在將樣品封閉在MicroRT毛細管中后，立即將樣品置于X射線束中，并開始獲取一系列短曝光幀。繼續進行，直到單元格停止變化（表明晶體已與鹽溶液達到平衡）或衍射顯著惡化。

對于更系統的研究表明，選擇一系列覆蓋不同相對濕度范圍的鹽溶液，比如從93%到68%。將相對濕度最高的鹽溶液注入MicroRT毛細管中，收獲一個晶體，并把毛細管拉過晶體并放到測角儀底座上。讓晶體達到平衡，然后獲取一些X射線數據幀，足夠確定單元格參數和分辨率。移除MicroRT毛細管，立即用含有下一個最高相對濕度溶液的毛細管替換它，讓晶體達到平衡，然后拍攝一些更多的幀。重復此過程，直到您探索了感興趣的相對濕度范圍。然后，戴上提供最佳衍射的鹽溶液毛細管，達到平衡，并進行快速冷凍，以評估低溫下的衍射質量。在這種“連續”方法中，晶體逐漸積累輻射損傷，這種損傷可能會掩蓋脫水引起的改善。

脫水實驗也可以同時進行。收獲幾個晶體，并將每個晶體封閉在含有不同鹽溶液的毛細管中。讓晶體達到平衡，然后檢查它們的衍射，以確定最佳鹽/濕度。在脫水過程中，晶體周圍可能會形成一些鹽晶體。這些的衍射點或環很容易識別，并且通?？梢詮哪姆治鲋信懦?。

文獻參考：

[1] Greenspan (1977) Humidity Fixed Points of Binary SaturatedAqueous Solutions. J. Res. Nat. Bureau Standards 81A:89.

[2] Rockland (1960) Saturated Salt Solutions for Static Control ofRelative Humidity between 5° and 40° C. Analytical Chemistry32:1375.

[3] Crowfoot et al. (1941) Crystal Structures of the Proteins An XRay Study of Palmar's Lactoglobulin. Nature 141:521.

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