永生化小鼠雪旺細胞使用協議

施萬細胞是研究涉及糖基化、再生能力降低、氧化應激以及其他神經退行性疾病的糖尿病神經病變發病機制的寶貴工具。這種永生化小鼠施萬細胞表達膠質細胞標記物（S100、GFAP、p75NTR）、參與施萬細胞發育和周圍髓鞘形成的轉錄因子（Krox20、Oct6、PAX3 和 SOX10），以及神經營養因子（NGF、BDNF、GDNF 和 CNTF）。

在生長因子如血小板源性生長因子-BB（PDGF-BB）、酸性成纖維細胞生長因子（aFGF）、β成纖維細胞生長因子（bFGF）或轉化生長因子-β1（TGF-β1）存在的情況下，這些細胞會表現出有絲分裂反應。IMS32 細胞可用于研究涉及周圍神經再生的作用機制，以及作為評估神經系統疾病發病機制的體外模型。使用免疫反應性來檢測細胞標記物。

艾美捷abm永生化小鼠雪旺細胞基本參數：

貨號：T0295

名稱：永生化小鼠施萬細胞（IMS32）

生物體：小鼠（M. musculus）

組織：大腦

供體歷史：ICR 小鼠

生長特性：貼壁，紡錘形

細胞類型：永生化細胞

儲存條件：液氮的氣相，或低于-130°C。

運輸條件：干冰運輸。

產品格式：冷凍

預期用途：本產品僅用于實驗室研究。不適用于任何動物或人類的治療用途，任何人類或動物的消費，或任何診斷用途。

生物安全等級：II

生長條件：

建議使用 PriCoat? T25 燒瓶（G299）或應用細胞外基質（G422）以促進細胞對培養容器的粘附。PriGrow III (TM003) + 10% FBS + 1% 青霉素/鏈霉素溶液（G255），37.0°C，5% CO?。

拆包和儲存說明：

1. 目視檢查包裝容器是否有泄漏或破損的跡象。

2. 立即將干冰包裝中的冷凍細胞轉移到低于-130°C的溫度中，最好在液氮氣相儲存，直到準備使用。

為了確保Z高的活性水平，在收到后盡快解凍小瓶并開始培養。如果需要繼續儲存，小瓶應僅儲存在低于-130°C或液氮氣相中。不要在-70°C下儲存，因為這會導致活性喪失。

解凍協議：

1. 在37°C水浴中快速搖晃解凍細胞（最多2分鐘）。瓶蓋應保持在水面之上，以最小化污染風險。

2. 用70%乙醇噴灑并擦拭瓶身外部以消毒。從這一點開始，所有操作應嚴格在生物安全柜內使用無菌條件進行。

3. 將細胞懸液轉移到含有5ml預加熱的完全生長培養基的15ml無菌圓錐管中。以125xg離心細胞5-7分鐘。

4. 在不干擾細胞沉淀物的情況下吸去上清液。將細胞沉淀物重新懸浮在推薦的預加熱的完全生長培養基中，并分裝到T25培養瓶中。

5. 在推薦的條件下培養細胞。

傳代協議：

下面給出的體積是針對T75培養瓶的；根據培養容器的大小按比例增加或減少體積。當培養容器80%融合時傳代細胞。

1. 吸去培養基，并加入2-3ml預加熱的0.25% Trypsin-EDTA到培養容器中。

2. 在顯微鏡下觀察細胞以確認脫落（通常在2-10分鐘內）。難以脫落的細胞可以放在37°C下，幾分鐘以促進脫落。

3. 通過向培養容器中加入相等體積的完全生長培養基來中和Trypsin-EDTA。

4. 將培養懸液轉移到無菌離心管中，并以125xg離心5分鐘。實際的離心時間和速度可能因細胞類型而異。

5. 吸去上清液，并用預加熱的新鮮完全生長培養基重新懸浮沉淀物。根據需要將適量的細胞懸液添加到新的培養容器中。

6. 在推薦的條件下培養細胞。

永生化小鼠雪旺細胞文獻參考：

Watabe, K., Fukuda, T., Tanaka, J., Honda, H., Toyohara, K., & Sakai, O. (1995). Spontaneously immortalized adult mouse Schwann cells secrete autocrine and paracrine growth-promoting activities. Journal of neuroscience research, 41(2), 279–290.