CellSafe/艾美捷HiSense UDG熱不穩定蛋白--低熱穩定性和易于失活

HiSense? UDG（尿嘧啶-DNA糖基化酶）熱敏感型含有在海洋細菌中發現的酶。與大腸桿菌中的UNG（尿嘧啶-DNA糖基化酶）一樣，它水解單鏈或雙鏈DNA中的尿嘧啶-糖苷鍵，切除尿嘧啶并在DNA中產生堿基敏感的無堿基位點。這些無堿基位點可以通過內切核酸酶、熱處理或堿基處理水解。根據DNA的制備方式，尿嘧啶DNA糖基化酶可以用來實現一般性、位點特異性或鏈特異性的含尿嘧啶DNA斷裂。這種酶顯示出較低的熱穩定性，因此更容易失活。

尿嘧啶-DNA糖基化酶可以用來在任何含有胸苷殘基的位點切割DNA。

由于尿嘧啶-DNA糖基化酶的熱敏感性，其主要用途是預防PCR中的交叉污染。與大腸桿菌中的酶相比；使用這種UNG制劑，沒有必要在擴增后立即冷凍PCR產物，或者將反應混合物保持在+70°C。

艾美捷CellSafe HiSense UDG熱不穩定蛋白#SCU-100組成：

Components                                    Size

Uracil-DNA Glycosylase(UDG) heat labile              100 ?l (1 unit/?l)

儲存：

在-20℃下儲存檢查產品標簽上的有效期。

CellSafe HiSense UDG熱不穩定蛋白特點：

低熱穩定性和易于失活，包括來自海洋細菌的酶。

高效水解單鏈或雙鏈DNA中的尿嘧啶-糖苷鍵。

預防PCR中的交叉污染。

測試方案：

1) 向20~50微升的PCR混合液中加入1微升（1單位）UDG。

2) 在25℃下反應5~10分鐘。

3) 在95℃下加熱2分鐘以使UDG失活。

4) 使用經過UDG處理的PCR混合液進行PCR。

CellSafe HiSense UDG熱不穩定蛋白結果：

使用PCR產物（包括尿嘧啶堿基）的尿嘧啶DNA糖基化酶的效率

泳道 1: 含有dUTP的1KB PCR產物的108個拷貝

泳道 2: 含有dUTP的1KB PCR產物的107個拷貝

泳道 3: 含有dUTP的1KB PCR產物的106個拷貝

泳道 4: 含有dUTP的1KB PCR產物的105個拷貝

泳道 5: 100bp DNA梯度

泳道 6: 含有dUTP的PCR產物的108個拷貝

泳道 7: 含有dUTP的PCR產物的107個拷貝

泳道 8: 含有dUTP的PCR產物的106個拷貝

泳道 9: 含有dUTP的PCR產物的105個拷貝

使用包括尿嘧啶堿基的連續稀釋的PCR產物進行了尿嘧啶DNA糖基化酶的效率測試。同時，HiSense? Taq主混合液也被用作陰性對照進行了測試。反應混合液先在25°C下孵育5分鐘，然后95°C下5分鐘，接著進行25個循環，每個循環包括95°C下30秒，60°C下30秒，72°C下1分鐘。HiSense? Taq主混合液（含UDG）除了dATP、dGTP、dCTP和dTTP外，還含有dUTP。

CellSafe致力于提供支原體全面解決方案，可以有效檢測、消除和預防影響細胞培養的支原體。作為CellSafe在中國區域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的CellSafe產品。