試劑制備丨TSA試劑盒：HRP Goat Anti-Mouse and CF488A

酪胺擴增，有時也稱為催化報告基因沉積 (CARD)，是一種酶介導的檢測方法，它利用辣根過氧化物酶 (HRP) 的催化活性原位產生靶蛋白或核酸序列的高密度標記。據報道，與傳統的親和素-生物素檢測相比，酪胺擴增方法的靈敏度提高了 100 倍?？蛇M行多輪酪胺信號放大，進行多重檢測。

TSA試劑盒提供了用于小鼠二次檢測的所有關鍵試劑，兔或生物素化的初級抗體，然后在細胞中擴增酪胺信號或組織切片。HRP二級試劑介導標記的酪氨酸酰胺在反應位點附近轉化為含有酪氨酸的蛋白質。這允許用大量染料或生物素分子標記的靶蛋白，產生與使用染料標記的第二抗體相比具有更強的熒光信號。

因此，TSA試劑盒提供了高靈敏度和信號背景比的優勢，使低豐度靶標的可視化成為可能使用傳統的免疫染色方法進行有效標記。

Tyramide擴增可以與染料標記的抗體或其他抗體組合使用用于多色成像的染色方法。兩個或多個酪酰胺反應也可以是按順序執行，以便在一個樣品上標記不同的目標。

這些試劑盒可與Biotin XX Tyramide或Biotium的下一代CF?染料一起使用Tyramides與我們的高性能山羊抗小鼠、山羊抗兔，或鏈親和素-HRP綴合物。CF?染料提供卓越的亮度和光穩定性與其他熒光染料相比。

艾美捷TSA試劑盒：HRP Goat Anti-Mouse and CF488A#BTM-33000組件：

CF? 染料或生物素-酪胺原液

HRP 山羊抗小鼠 IgG(高度交叉吸附)

BSA 用于阻塞

Tyramide Amplification Buffer Plus *

30% 過氧化氫*

TSA試劑盒：HRP Goat Anti-Mouse and CF488A特征：

將靈敏度提高多達 100 倍

使用較低的一抗濃度

增強挑戰性樣品中的信號，例如人類 FFPE 組織

從 6 種明亮且耐光的 CF? 染料或生物素中選擇

該試劑盒包含使用山羊抗小鼠 HRP 二抗和熒光 CF? 染料或生物素進行酪胺信號放大 (TSA) 以增加免疫熒光信號的試劑。

試劑制備：

1.如果使用甲醛固定，則在PBS中制備3.75%的甲醛溶液在冰上預冷。如果目標蛋白質或結構能夠受到甲醇（如肌動蛋白、核仁素）的干擾。

2.如果使用甲醛固定，則制備滲透緩沖液：0.5%Triton?X-100在PBS中。

3.通過將1g BSA溶解在100mL含有0.5%的PBS中來制備封閉緩沖液Triton?X-100。我們建議立即使用阻塞緩沖區。未使用的阻塞緩沖液可以等分，并在-20°C下儲存。

4.將100uL的PBS加入到HRP山羊抗兔IgG、HRP山羊抗體小鼠IgG中，或HRP-鏈親和素，并渦旋以溶解所有固體，制成1mg/mL的原液解決方案未使用的儲備溶液可以在4°C下儲存長達3個月。請勿添加疊氮化鈉（NaN3)解決方案。

5.僅適用于鏈親和素或生物素XX酪酰胺試劑盒：制備生物素封閉洗滌緩沖液：1%BSA和0.05%TWEEN?20在PBS中的溶液。

6.僅適用于鏈親和素或生物素XX酪胺試劑盒：制備未標記的鏈親和素溶液：0.1mg/mL鏈霉親和素在生物素封閉洗滌緩沖液中（在步驟5中制備）。

7.僅適用于鏈親和素或生物素XX酪胺試劑盒：制備生物素溶液：0.5 mg/mL生物素封閉洗滌緩沖液中的生物素（在步驟5中制備）。

Biotium公司是一家在熒光技術領域獨樹一幟的生物技術公司，公司位于美國加利福尼亞的BAY AREA------中外知名首要的生物科技中心。該公司一直致力于開發和生產用于生物醫學研究的熒光指示劑及其他特殊生化產品。其產品被廣泛應用于細胞生 物學、蛋白質組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經科學、血液流動檢測及大規模藥物篩選等眾多領域。Biotium公司專利產品眾多，包括已經被廣泛使用的實時PCR定量熒光染料EvaGreen、具有劃時代意義的凝膠核酸染料Gel Red和GelGreen，以及最新推出的Cheetah Taq熱啟動酶和CF系列蛋白質標記染料等。 n目前，Biotium已將其許多專利技術授權給一些主要的國際生物技術公司，包括安捷倫、BD生物科學、Biolegend、BioRad、EMD Millipore、Illumina、PerkinElmer、Qiagen、Roche、Sartorius AG、Sigma-Aldrich、Thermo Fisher Scientific等。