FuGENE丨FuGENE HD DNA轉染試劑如何使用？

FuGENE HD 是一種100%合成的、多組分的、非脂質體轉染試劑，專為將 DNA 傳遞到更具挑戰性的真核細胞和昆蟲細胞系而設計。FuGENE HD 與核酸和細胞膜相互作用，以提供高效且安全地進入細胞的方式。這種機制使用戶能夠克服難以轉染的細胞系中的障礙，例如原代細胞、干細胞和懸浮細胞，并且已成功用于轉染超過1000種細胞系。憑借直接且快速的方案，FuGENE HD 允許研究人員和科學家釋放寶貴的實驗室時間。

艾美捷FuGENE HD DNA轉染試劑（#HD-1000）用于真核細胞和昆蟲細胞的瞬時和穩定轉染。將DNA導入真核細胞和昆蟲細胞，需要轉染試劑具有高效轉染和細胞毒性極低的特質。

FuGENE可提供FuGENE 6、FuGENEHD和FuGENE 4K三種DNA轉染試劑，以滿足研究人員的不同需求。FuGENE DNA轉染試劑適用于無論是常規的高性價比轉染，還是敏感的，難轉染的原代細胞或干細胞。其實驗步驟簡單、省時，在無血清或含血清培養基中均可轉染?？蓾M足科學研究和生產抗體、蛋白質及病毒的需求。

FuGENE HD試劑：DNA復合物的制備和細胞轉染

貼壁細胞和35毫米培養皿中的懸浮細胞

對于初步優化，使用FuGENE HD試劑：DNA比例分別為1.5:1、2:1、2.5:1、3:1、3.5:1和4:1（微升FuGENE HD試劑對應微克DNA）來準備復合物，下面描述的是為單個六孔板孔或35毫米培養皿準備復合物的方法。這些比例對于常用的貼壁細胞和懸浮細胞通常效果很好。

重要提示：即使在有血清的情況下轉染細胞，FuGENE HD試劑：DNA復合物也必須在不含血清的培養基中制備。

比率概述：

制備足以用于35mm培養皿、六孔板中的一孔或二十個96孔板孔的復合體，比率為4：

如何使用FuGENE HD DNA轉染試劑？

1.) 在使用前讓FuGENE HD轉染試劑、DNA和稀釋液調整至室溫。渦旋混合一秒，或倒置FuGENE HD轉染試劑瓶以混合。

2.) 在無血清培養基（無抗生素或殺真菌劑）中稀釋DNA：

標記六個小的無菌管：“1.5:1, 2:1, 2.5:1, 3:1, 3.5:1 & 4:1”。向管中加入預熱的無血清培養基，以便在步驟3中加入FuGENE HD試劑和步驟2中加入DNA后的最終體積為100微升。

向每個管中加入2微克DNA。渦旋混合一秒或輕彈管子以混合。

3.) 向稀釋后的DNA中加入FuGENE HD試劑（無抗生素或殺真菌劑）：

直接將FuGENE HD試劑滴入每個六個管中的培養基里，避免與塑料管壁接觸：第一個管中加入3微升，第二個管中加入4微升，第三個管中加入5微升，第四個管中加入6微升，第五個管中加入7微升，最后一個管中加入8微升?，F在每個管中的體積應等于100微升。

4.) 混合并孵化復合物：

輕敲管子或渦旋混合一秒以混合內容物。在室溫下孵化轉染試劑：DNA復合物5-15分鐘。

5.) 將復合物加入細胞：

從孵化器中取出培養容器。無需移除生長培養基。以滴加方式將轉染試劑：DNA復合物加入細胞。（有關向特定容器大小添加復合物數量的詳細信息，請參見表1）。搖動孔板或燒瓶以確保分布到整個板表面。

6.) 將細胞放回孵化器，直到進行基因表達檢測。

一旦FuGENE HD試劑：DNA復合物已加入細胞，就無需移除并更換為新鮮培養基（與某些其他轉染試劑不同）。根據我們的經驗，大多數常見實驗室細胞類型（COS-1、CHO-K1、HEK-293、HeLa）在進行基因表達檢測（24-72小時后）之前持續暴露于試劑：DNA復合物，不會影響活性。如果您希望在轉染過程中（步驟4）使用無血清培養基，則在轉染后3-8小時內用含血清的培養基替換。如果您觀察到超過10%的細胞死亡，請參考故障排除部分。

艾美捷科技是FuGENE的中國代理商，為科研工作者提供優質的產品與服務。