艾美捷鑰孔血藍蛋白KLH使用說明

鑰孔血藍蛋白KLH是通過添加磺基SMCC交聯劑活化的馬來酰亞胺。主動鉤子?KLH快速偶聯到肽和蛋白質上的游離巰基。這種活化的載體蛋白節省了時間和金錢，因為不需要單獨的交聯劑，反應是一步反應。

鎖孔帽貝血藍蛋白是一種廣泛使用的載體蛋白，因為它的分子量大（4.5x105-1.3x107Da聚集體）和大量伯胺，可以與交聯劑反應以偶聯肽。

鑰孔血藍蛋白KLH有10毫克小瓶或我們的OneQuant?一次性使用線為8 x 2mg小瓶。

艾美捷鑰孔血藍蛋白KLH#GBS-786-094是KLH（鎖孔帽貝血藍蛋白）的一種預激活形式，具有被磺基SMCC激活，并準備通過半胱氨酸殘基。KLH是從軟體動物圓紋蘇云蟲中分離出來的，屬于一個巨大的呼吸蛋白家族，血藍蛋白，發現于軟體動物和節肢動物。KLH的大分子量（400‐3000kD）使其成為一種優異的免疫原的選擇。鑰孔血藍蛋白 KLH共有300‐600個反應基團可用于連接和制作ActiveHOOK? KLH是一種出色的載體蛋白。OneQuant鑰孔血藍蛋白 KLH以OneQuant凍干形式提供? 格式，2mg/瓶。

重要信息：

a.為了確保完全耦合，我們建議使用推薦數量的試劑，因為這些試劑向其上的馬來酰亞胺基團提供摩爾過量的肽載體蛋白。

b.對于不溶于1X Optimizer緩沖液III的肽，我們建議使用二甲基亞砜（<30%）。

c.該試劑盒設計用于通過游離巰基殘基。埃爾曼試劑（類別號BC87）可以測定游離巰基。如果被氧化，蛋白質和肽可以被0.1-0.5%的β-巰基乙醇（類別號BC98）、5‐50mM DTT（類別號786‐227）或1‐10mM TCEP（類別號786‐230）。還原后，必須去除還原劑，我們建議

使用凝膠過濾旋轉柱（SpinOUT?，目錄號786‐170786‐171）。此方法不是適用于小肽（MW<1500）。

協議

1.溶解一小瓶（2mg）OneQuant? 活動掛鉤? 500μl 1X優化器中的KLH緩沖器? III或適用于巰基反應的緩沖液。

2.使用前立即溶解2-10mg含巰基的肽或蛋白質在500μl 1X Optimizer緩沖區中? III或適用于巰基反應的緩沖液。

3.將含巰基的肽添加到ActiveHOOK中? KLH。翻轉混合管4-5次。

4.在室溫下培養30分鐘?；旌戏磻锊⒎跤?°C下再加熱1小時。

5.用合適的儲存緩沖液（如PBS）透析反應1-2小時2-3改變透析緩沖液，以去除未偶聯的肽。

6.透析后，載體蛋白-肽綴合物即可使用。承運人蛋白質-肽綴合物可以儲存在-20°C下以備日后使用。

將‐NH2修飾為‐SH用于缺乏巰基的蛋白質和肽

1.將待巰基化的肽或蛋白質懸浮在50mM三乙醇胺中，0.15M NaCl，1mM EDTA pH8.0。

2.加入3-4倍摩爾過量的特勞特試劑（Cat#BC95）。

3.在氮氣下，在室溫下培養反應45分鐘。

4.使用SpinOUT從未反應的Traut試劑中分離巰基化產物?列（SpinOUT? GT‐600（目錄號786‐170））或透析

G-Biosciences是一家專注于蛋白質組學研究的美國公司，產品廣泛應用于學術研究和工業制造領域，包括：蛋白質檢測、樣品制備、電泳、蛋白質印跡、質譜、測定開發、抗體生產和蛋白質純化等。目前，G-Biosciences的高品質產品已經被超過25,000篇文章引用，并且這個數據還是不斷增加。G-Biosciences旨在提供試劑、特殊化學品、緩沖液、分析、應用試劑盒等各類研究工具；G-Biosciences還可以提供符合生物技術行業 cGMP 要求產品、高質量的定制和 OEM 制造。目前廠家已經通過美國ISO 9001：2015認證。