PI4K活性ELISA檢測設計&檢測結果

PI4激酶活性檢測是一種競爭性酶聯免疫吸附試驗（ELISA），其信號與測量到的PI(4)P的數量成反比。在加入PI(4)P檢測試劑之前，使用EDTA停止酶反應。然后將這種混合物轉移到PI(4)P檢測板進行競爭性結合。使用過氧化物酶標記的二抗和比色法檢測來檢測PI(4)P檢測試劑與板結合的數量。

磷脂酰肌醇4-磷酸（PI(4)P）是在哺乳動物細胞中發現的最多的單磷酸磷脂酰肌醇。它由磷脂酰肌醇4-激酶（PI4K）產生，該激酶磷酸化磷脂酰肌醇的肌醇環的D-4位置。根據它們的分子質量、由去污劑和腺苷的調節，PI 4-激酶被分類為兩種類型，II型和III型。II型PI 4-激酶包括PI4KIIa（PI4K2A），它參與了許多生物過程，從細胞生長到內吞和外排。它還是腫瘤生長的新調節器，并在高爾基體內產生富含PtdIns4P的區域。PI4KIIb（PI4K2B）主要是胞質的，它被招募到膜上并刺激PI(4,5)P2的合成。III型PI 4-激酶，PI4KIIIa（PI4K3A），在丙型肝炎病毒復制中發揮作用。這些病毒利用PI4KIIIa產生富含PI(4)P的環境，增加細胞中PI(4)P的水平。PI4KIIIb（PI4KB）在有絲分裂期間調節高爾基體的重組。由于其調節分泌顆粒釋放的能力，這種酶對于葡萄糖誘導的胰島素分泌至關重要。所有這些都使PI 4-激酶成為一系列生物功能、疾病狀態和感染的有趣靶標。

PI4激酶活性測定被設計用于檢測和定量PI4-激酶反應的最終產物PI（4）P。

艾美捷PI4K活性ELISA（#EEB-K-4000K）：

分類：試劑盒與檢測

篩選：活性，激酶

運輸溫度：根據目的地使用干冰和/或凝膠冰運輸——產品可能分兩個盒子運輸

儲存：第一部分在4-8°C下儲存；第二部分在-80°C下儲存

PI4K活性ELISA檢測設計：

Echelon公司的PI 4-激酶活性ELISA（酶聯免疫吸附試驗）旨在檢測并定量PI 4-激酶反應的最終產物，即PI(4)P。PI4-激酶活性ELISA是一種競爭性ELISA，其信號與測量到的PI(4)P的數量成反比。在加入PI(4)P檢測試劑之前，使用EDTA停止酶反應。然后將這種混合物轉移到PI(4)P檢測板進行競爭性結合。使用過氧化物酶標記的二抗和比色法檢測來檢測PI(4)P檢測試劑與板結合的數量。

PI4K活性ELISA檢測結果：

PI4-激酶活性可以通過將含有酶反應產物的孔的吸收值與標準曲線中的值進行比較來估計。將獲得的吸光度值與PI（4）P的log（以pmol為單位）/標準進行繪圖，以使用S型劑量-反應（可變斜率）相關性生成標準曲線。通過從酶反應獲得的吸光度值進行插值，確定pmol中的PI（4）P水平。見下圖。

左圖：用GraphPad軟件進行非線性回歸分析，生成PI（4）P標準曲線。采用對數（激動劑）與響應——可變斜率（四參數）分析。為了獲得Z佳結果，使用0 pmol PI（4）P和空白對照。

右圖：反應在室溫下進行3小時，用0.33mg/mLPI底物（K-4001K）和1.11mATP振蕩。

PI4K活性ELISA文獻參考：

1. Jiang, X. et. al. 2022. Targeting PI4KA sensitizes refractory leukemia to chemotherapy by modulating the ERK/AMPK/ OXPHOS axis. Theronostics 12: 6972-6988.

2. Sun, A. et. al. 2003. PPhosphatidylinositol 4-kinase IIIβ mediates contraction-induced GLUT4 translocation and shows its anti-diabetic action in cardiomyocytes. Cellular and Molecular Life Sciences