檢測程序丨ICL人Alpha1-抗胰凝乳蛋白酶ELISA試劑盒

Alpha 1-抗胰蛋白酶（Alpha-1 Antitrypsin，簡稱AAT）是一種由肝臟合成的血漿蛋白，它在人體中扮演著重要的保護角色，主要功能是抑制多種胰蛋白酶和其他蛋白水解酶的活性，從而保護肺部組織不受這些酶的破壞。

Alpha 1-抗胰蛋白酶在臨床上的應用非常廣泛，它不僅用于治療與AAT缺乏相關的肺部疾病，如非典型肺炎、囊性纖維化和慢性阻塞性肺病，還可以用于治療其他一些疾病，如肝臟疾病和自身免疫性疾病。此外，Alpha 1-抗胰蛋白酶的濃度測定也是臨床上評估肝臟功能和診斷AAT缺乏癥的重要指標。

在實驗室研究中，Alpha 1-抗胰蛋白酶也被用作生物標記物，用于研究炎癥反應、肺纖維化和腫瘤發展等生物學過程。

人Alpha1-抗胰凝乳蛋白酶ELISA試劑盒雙抗體夾心ELISA的原理如圖1所示。在該測定中，樣品中存在的α1-抗胰凝乳蛋白酶（CYT）與抗CYT抗體反應，抗CYT抗體已吸附到聚苯乙烯微量滴定孔的表面。通過洗滌除去未結合的蛋白質后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）偶聯的抗CYT抗體。這些酶標記的抗體與先前結合的CYT形成復合物。在另一個洗滌步驟之后，通過添加顯色底物3,3'，5,5'-四甲基聯苯胺（TMB）來測定與免疫吸附劑結合的酶。結合酶的數量直接隨測試樣品中CYT的濃度而變化；因此，450 nm處的吸光度是測試樣品中CYT濃度的量度。測試樣品中的CYT量可以從標準品構建的標準曲線中進行插值，并針對樣品稀釋度進行校正。

艾美捷人Alpha1-抗胰凝乳蛋白酶ELISA試劑盒：

貨號  E-80CYT

抗體類型 酶聯免疫吸附試驗

反應性 人類

宿主 山羊

特異性/目標 Alpha 1-抗胰蛋白酶

尺寸 1.0

檢測范圍 6.25 納克/毫升 - 400 納克/毫升

靈敏度 2.518納克/毫升

測定時間 80 分鐘

樣品類型 血漿、血清

貯存 2-8℃

人Alpha1-抗胰凝乳蛋白酶ELISA試劑盒組件：

抗體包被的微孔板

酶結合物檢測抗體

校準劑

稀釋液濃縮液

洗滌液濃縮液

色原-底物溶液（3,3',5,5'-四甲基聯苯胺（TMB））

停止液

人Alpha1-抗胰凝乳蛋白酶ELISA試劑盒檢測程序：

1. 所有樣品和標準品應以重復兩次的方式進行檢測。

2. 應盡快將標準品和待測樣品加載到ELISA孔中，以避免吸光度（OD）讀數發生偏移。使用多通道移液器可以減少這種情況的發生。分別以重復兩次的方式移液100微升以下標準品：

- 標準品0（0.0 ng/mL）

- 標準品1（6.25 ng/mL）

- 標準品2（12.50 ng/mL）

- 標準品3（25 ng/mL）

- 標準品4（50 ng/mL）

- 標準品5（100 ng/mL）

- 標準品6（200 ng/mL）

- 標準品7（400 ng/mL）

3. 將100微升的樣品（重復兩次）移液至預先指定的孔中。

4. 在室溫下孵育微孔板六十（60 ± 2）分鐘。孵育過程中保持板蓋覆蓋并保持水平。

5. 孵育后，抽吸孔中的內容物。

6. 用適當稀釋的洗滌液完全填充每個孔，然后抽吸。重復三次，總共進行四次洗滌。如果手動洗滌：用洗滌緩沖液完全填充孔，倒轉板子然后將內容物倒入廢液容器中。隨后在吸水紙上猛烈敲擊孔以去除殘留緩沖液。重復三次，總共進行四次洗滌。

7. 向每個孔中移液100微升適當稀釋的酶-抗體結合物。在室溫下孵育十五（15 ± 2）分鐘。孵育過程中保持板蓋覆蓋并保持水平。

8. 如步驟5/6所述進行洗滌和拍干孔。

9. 向每個孔中移液100微升TMB底物溶液。

10. 在黑暗中室溫孵育精確五分鐘。

11. 五分鐘后，向每個孔中加入100微升停止液。

12. 在30分鐘內測定每個孔內容物的吸光度（450納米）。根據制造商的規格校準板閱讀器。