蛋白質羰基含量檢測試劑盒試劑&樣品制備方案

蛋白質羰基是蛋白質氧化修飾過程中多種氨基酸的早期標志，其含量反映了蛋白質氧化損傷程度，是衡量蛋白質氧化損傷的主要指標。原理是羰基基團與2,4-二硝基苯肼反應，生成具有在370 nm處特征吸收峰的紅色2,4-二硝基苯肼酮。

艾美捷蛋白質羰基含量檢測試劑盒基本信息：

貨號：D-AKC1200-96T

規格：: 48T / 96T

儲存：在4°C下儲存12個月，避光

提供的材料和儲存條件：

所需材料但未提供的：

· 可測量370 nm處吸光度的微孔板閱讀器或可見光分光光度計

· 孵化器、制冰機、冷藏離心機

· 96孔板或微玻璃比色皿、精密移液器、一次性移液頭

· 去離子水、乙醇、乙酸乙酯

· Dounce勻漿器（用于組織樣本）

試劑制備：

提取緩沖液：按照提供的使用說明使用即可。使用前應將其平衡至室溫。存放于4°C。工作抗氧化劑：根據樣本數量制備，取0.1克并用1毫升去離子水溶解，1毫升可用于10個樣本。存放于4°C，避光。顯色劑：按照提供的使用說明使用即可。使用前應將其平衡至室溫。存放于4°C，避光。HCl：按照提供的使用說明使用即可。使用前應將其平衡至室溫。存放于4°C。TCA：按照提供的使用說明使用即可。使用前應將其平衡至室溫。存放于4°C。鹽酸胍：按照提供的使用說明使用即可。使用前應將其平衡至室溫。存放于4°C。

樣品制備：

1. 動植物組織樣品：稱取0.1克組織，加入1毫升提取緩沖液，在冰上均質。以4,000 g離心10分鐘于4°C。取上清液，加入0.1毫升工作抗氧化劑，室溫下靜置10分鐘，以10,000 g離心10分鐘于4°C。使用上清液進行測定，并將其放置在冰上待測。

2. 細胞或細菌：將5×10^6個細胞或細菌收集到離心管中，用冷PBS洗滌細胞或細菌，離心后廢棄上清液；加入1毫升提取緩沖液超聲破碎細胞或細菌5分鐘（功率20%或200瓦特，超聲3秒，間隔7秒，重復30次）。以10,000 g離心10分鐘于4°C。使用上清液進行測定，并將其放置在冰上待測。

3. 血清（血漿）樣本：直接進行測試。

數據分析

注意：我們為您提供了計算公式，包括推導過程和最終公式。兩者完全相等。建議使用粗體的簡潔計算公式作為最終公式。

A. 96孔板計算公式

1. 根據蛋白質濃度計算

蛋白質羰基含量（μmol/mg蛋白）= [ΔA×V總÷(ε×d)]÷(V樣品×Cpr) = 0.454×ΔA÷Cpr

2. 根據樣品重量計算

蛋白質羰基含量（μmol/g鮮重）= [ΔA×V總÷(ε×d)]÷(W×V樣品÷V總樣品) = 0.454×ΔA÷W

3. 根據細胞或細菌數量計算

蛋白質羰基含量（μmol/10^4）= [ΔA×V總÷(ε×d)]÷(500×V樣品÷V總樣品) = 0.454×ΔA÷500

4. 根據液體體積計算

蛋白質羰基含量（μmol/mL）= [ΔA×V總÷(ε×d)]÷V樣品 = 0.454×ΔA

其中：ΔA = A測試 - A對照；V總：總反應體積，0.3 mL；ε：羰基摩爾消光系數，22 L/mmol/cm；d：96孔板直徑，0.5 cm；V樣品：添加的樣品體積，0.06 mL；V總樣品：添加的提取緩沖液體積，1 mL；Cpr：樣品蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品重量，g；500：細胞或細菌的總數，5×10^6。

B. 微玻璃比色皿計算公式

上述計算公式中的光學直徑 d：可以調整為 d：1 cm 進行計算。

注意：如果基于樣品蛋白質濃度的計算方法，建議使用 EZMeta? 蛋白質羰基比色測定試劑盒。

僅供研究使用，不用于人類或臨床診斷