末端補體復合物(TCC)檢測試劑盒，炎癥和自身免疫疾病研究工具

補體TCC是一種酶免疫測定法，用于半定量測定人EDTA血漿中的可溶性末端補體復合物（sTCC，也稱為TCC或sC5b-9）。該產品僅限于專業使用。結果不得用于臨床診斷或患者管理。僅限研究使用。

總結和解釋：

在所有需要確定補體功能的情況下，TCC水平可以作為對三條補體途徑功能評估的補充，提供非常有價值的信息。它反映了給定樣本中補體的歷史性體內活性。

補體系統在慢性、自身免疫和感染性疾病中發揮著至關重要的作用。補體激活有三條途徑，即經典途徑、替代途徑和凝集素途徑?？扇苄阅┒搜a體復合物是末端途徑的產物，可以是所有三條補體激活途徑的結果。由于TCC反映了最終末端途徑的激活，而不考慮最初涉及的途徑，因此它是評估補體激活的特別好的候選指標（Harboe 2011）。

眾所周知，補體系統在各種病理條件下組織層面炎癥過程的發展和放大中起著關鍵作用。例如在溶血性尿毒癥綜合征（HUS）（Noris 2012）、系統性紅斑狼瘡（SLE）（Porcel 1995, Mollnes 1999）和類風濕性關節炎（RA）（Struglics 2016）中可以檢測到TCC水平的增加。補體系統也可以被人工表面激活，例如在血液透析或心肺轉流期間，導致TCC水平增加（Deppish 1990, Ovrum 1996）。TCC也非常適合研究醫療器械中生物材料激活補體的情況（Stang 2014）。TCC可以像補體的其他激活產物一樣，在使用新表位特異性單克隆抗體的測定中被測量。新表位隱藏在原始補體成分中，并在補體激活后暴露（Mollnes 1985, Mollnes 1993）。

艾美捷末端補體復合物(TCC)檢測試劑盒（Complement TCC）（#COMPLTCCRUO）的測定原理：

該測定是一種比色法夾心ELISA。樣本在測定稀釋液中稀釋，100?L稀釋樣本轉移到微孔板孔中，并在室溫下孵育60分鐘。在這次第一次孵育期間，樣本中的TCC被預涂在微孔板孔表面的抗TCC單克隆抗體捕獲。洗滌以去除未結合的物質后，加入第二種辣根過氧化物酶（HRP）標記的單克隆抗體以檢測結合到孔中的TCC。孵育30分鐘后再次洗滌孔，并添加底物進行孵育。30分鐘后停止顏色發展，并在分光光度計中測量顏色。顏色的深淺與結合到孔中的TCC量成正比。TCC的量通過與校準樣本的顏色發展進行比較來確定。

操作程序：

1. 將試劑（微孔板、校準器、對照、稀釋液、洗滌液、結合物、底物和終止液）平衡至室溫（20°C - 25°C）。

2. 將洗滌液稀釋30倍（例如，30 ml濃縮洗滌液 + 870 ml純水）。

3. 將EDTA血漿樣本在室溫下解凍。

4. 將解凍的血漿樣本保存在冰上。

5. 用稀釋液1/10稀釋樣本（例如，30 ?l血漿 + 270 ?l稀釋液）。建議使用預稀釋板。

6. 將100?L稀釋樣本、校準器和對照轉移到微孔板孔中，每孔兩份，并在室溫下孵育60分鐘。

注意：建議快速將樣本、校準器和對照轉移到板上，以避免信號漂移。

7. 用稀釋洗滌液300 ?l洗滌3次，通過填充和清空孔來完成。最后一次洗滌后，通過在吸水紙上輕敲條帶來清空孔。

8. 向孔中加入100 ?l結合物。在室溫下孵育30分鐘。

用稀釋洗滌液300 ?l洗滌3次，通過填充和清空孔來完成。最后一次洗滌后，通過在吸水紙上輕敲條帶來清空孔。

9. 向孔中加入100 ?l底物。在室溫下孵育30分鐘。

10. 向孔中加入100 ?l終止液。

11. 在酶標儀上讀取450 nm處的吸光度。以620 nm作為參考波長讀取。

結果計算：

從450nm波長中減去參考波長，并計算所有樣本的平均OD值。通過繪制校準器的OD值與濃度構建校準曲線。六種校準器的值為0 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL和400 ng/mL。根據校準曲線讀取未知樣本的濃度。

注意：本IFU中的所有性能數據都是使用4參數曲線擬合計算的。用戶可以選擇不同的曲線擬合。建議每個實驗室使用選定的曲線擬合建立參考范圍。

注意：要計算樣本中TCC的濃度，必須根據上述協議進行稀釋補償，即10倍。如果樣本結果超出校準曲線，建議進行更高倍數的稀釋，并在計算樣本中的濃度時考慮這一點。

請注意：上圖顯示的是半定量標準曲線的示例，不應用于實際樣本的解釋。

校準器曲線示例：

末端補體復合物(TCC)檢測試劑盒（Complement TCC）文獻參考：

Bergseth et al. Molecular Immunology 56 (2013) 232–239. An international serum standard for

application in assays to detect human complement activation products

Deppisch et al, Kidney Int. 1990 Feb;37(2):696-706. Fluid phase generation of terminal

complement complex as a novel index of bioincompatibility

Harboe et al, Adv Drug Deliv Rev. 2011 Sep 16;63(12):976-87. Advances in assay of

complement function and activation.