牛IgA ELISA試劑盒/Bovine IgA ELISA Kit檢測原理

牛 IgA ELISA 試劑盒/Bovine IgA ELISA Kit是一種高靈敏度的雙位點酶聯免疫測定法（ELISA），用于測量牛生物樣品中的IgA。如果ELISA在預期用途之外使用，則用戶可能需要針對所述用途進行優化。

在該測定中，樣品中存在的IgA與已吸附在聚苯乙烯微量滴定池表面的抗IgA抗體反應。在通過洗滌去除未結合的蛋白質后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）綴合的抗IgA抗體。這些酶標記的抗體與先前結合的IgA形成復合物。在另一個洗滌步驟之后，通過添加顯色底物3，3’，5，5’-四甲基聯苯胺（TMB）來測定與免疫吸附結合的酶。結合酶的量與所測試樣品中IgA的濃度直接相關；因此，在450nm處的吸光度是測試樣品中IgA濃度的測量值。試驗樣品中IgA的量可以根據標準曲線進行插值，并根據樣品稀釋度進行校正。

艾美捷Bovine lgA ELISA試劑盒（E-10A）：

抗體類型 ELISA（酶聯免疫吸附試驗）

反應性 牛/奶牛

宿主 兔子

特異性/目標 IgA（免疫球蛋白A）

大小 1.0

檢測范圍 12.5 納克/毫升 400 納克/毫升

靈敏度 7.009 納克/毫升

檢測時間 90 分鐘

樣本類型 牛奶、血漿、血清

儲存條件 2-8攝氏度

量化樣品中的總牛IgA

Bovine lgA ELISA試劑盒產品組分：

抗體包被微孔板

酶聯檢測抗體

校準液

稀釋液濃縮液

洗滌液濃縮液

顯色底物溶液（3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB)）

終止液

測定程序：

1. 所有樣本和標準品都應進行雙份測定。

2. 應盡快將標準品和測試樣本（s）裝入ELISA孔中，以避免吸光度(OD)讀數的偏移。使用多通道移液管可以減少這種情況的發生。將以下標準品和樣本各取100 μL（雙份）吸入預指定的孔中：

標準0（0.0 ng/mL）雙份

標準1（6.25 ng/mL）雙份

標準2（12.50 ng/mL）雙份

標準3（25 ng/mL）雙份

標準4（50 ng/mL）雙份

標準5（100 ng/mL）雙份

標準6（200 ng/mL）雙份

樣本（雙份）注入預指定的孔中。

3. 將微孔板在室溫下孵育六十（60 ± 2）分鐘。孵育期間要保持板蓋蓋好并保持水平。

4. 孵育后，吸去孔中的內容物。

5. 用適當稀釋的洗滌液完全填滿每個孔，然后吸去。重復三次，總共進行四次洗滌。如果手動洗滌：用洗滌緩沖液完全填滿孔，然后將板倒置，將內容物倒入或搖晃到廢液容器中。然后在吸水紙上用力敲擊孔以去除殘留的緩沖液。重復三次，總共進行四次洗滌。

6. 將100 μL適當稀釋的酶-抗體結合物吸入每個孔中。在室溫下孵育二十（20 ± 2）分鐘。孵育期間要保持板蓋蓋好，避光并保持水平。

7. 如步驟5/6所述洗滌并吸干孔中的內容物。

8. 將100 μL的TMB底物溶液吸入每個孔中。

9. 在避光條件下，在室溫下精確孵育十分鐘（10）。

10. 十分鐘后，向每個孔中加入100 μL的終止液。

11. 在30分鐘內測定每個孔中內容物的吸光度（450 nm）。根據制造商的規格校準板式讀取器。

結果計算：

1. 從每個樣本的測試值中減去平均背景值（標準零的吸光度平均讀數）。

2. 計算每個標準品的重復讀數的平均值，并使用這些結果構建標準曲線。通過使用能夠生成四參數邏輯曲線擬合的計算機軟件來減少數據來構建標準曲線。也可以使用二階多項式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們對數據的擬合將不那么精確。

3. 從標準曲線中插值測試樣本值。校正血清稀釋因子，以得出原始樣本中的IgA濃度。

僅用于研究。非診斷用途。僅限體外使用。