COX1抑制劑篩選檢測試劑盒測定協議&示例結果

COX1（環氧合酶1），也稱為前列腺素內過氧化物合酶1（PTGS），是一種過氧化物酶，通過將花生四烯酸轉化為前列腺素H2參與前列腺素的形成。COX1在大多數細胞中恒定表達，并參與組織穩態。COX-1通過增加粘液和碳酸氫鹽的形成，減少酸和胃蛋白酶的分泌，并保持適當的血流，促進胃粘膜的細胞保護。它參與血小板中血栓素A2（TxA2）的形成，這刺激了聚集和血管收縮。COX1和COX2在523位點不同，COX2有一個纈氨酸，而COX1有一個異亮氨酸殘基，這使得開發特定抑制劑成為一個挑戰。使用COX抑制劑或NSAIDs（非甾體抗炎藥）是常見的用于管理疼痛和炎癥的方法。傳統的NSAIDs，如阿司匹林和布洛芬，可能導致消化系統的損害。使用低劑量阿司匹林可以幫助預防動脈血栓形成，發現其他能夠抑制COX1的化合物可能證明在心血管疾病治療中作為輔助藥物是有益的。

COX1抑制劑篩查試劑盒旨在測量COX1（環氧化酶1）活性，用于篩查和分析應用。該檢測試劑盒采用方便的96孔格式，含有足夠的純化重組COX1、Amplex?Red、花生四烯酸稀釋劑、COX檢測緩沖液和100%乙醇，可用于100種酶反應。

艾美捷COX1抑制劑篩選檢測試劑盒：

貨號：BPS-82203

測定試劑盒格式：熒光生成

物種：人類

需要但不提供的物料：

花生四烯酸（Cayman Chemical #90010.1）

可調微量移液器和無菌吸頭

能夠在λex535/λem590 nm下測量的熒光板讀數器

儲存/穩定性：

如果按照指示儲存材料，這個測定試劑盒在收到日期后的6個月內將表現最佳。

應用：研究酶動力學，篩選小分子抑制劑，用于藥物發現和高通量篩選應用。

運輸溫度：-80°C

科學類別：代謝酶

僅供研究使用

COX1抑制劑篩選檢測試劑盒測定協議：

? 所有樣本和對照應以雙份進行。

? 測定應包括“陰性對照”、“陽性對照”和“試驗抑制劑”條件。

? 建議使用時將稀釋后的蛋白質保持在冰上。

? 有關蛋白質處理的詳細信息，請參閱蛋白質常見問題解答（bpsbioscience.com）。

? 推薦使用Valdecoxib作為內部對照。如果不對控制抑制劑進行劑量反應曲線測定，建議以0.1倍、1倍和10倍IC50值運行控制抑制劑，IC50值如下所示。

1. 將COX測定緩沖液和Amplex? Red解凍。

2. 在冰上解凍COX1。輕輕旋轉管子以回收其全部內容物。

3. 用COX測定緩沖液將COX1稀釋至35 ng/?l（每個孔需要20 ?l）。

4. 將稀釋后的COX1 20 ?l添加到所有孔中，除了“陰性對照”孔。

5. 向“陰性對照”孔中添加70 ?l的COX測定緩沖液。

6. 準備試驗抑制劑（每個孔10 ?l）：對于滴定，準備比期望的最終濃度高10倍的連續稀釋。反應的最終體積為100 ?l。

6.1. 如果試驗抑制劑是水溶性的，在COX測定緩沖液中準備比期望的最終濃度高10倍的連續稀釋。對于陽性和陰性對照，使用COX測定緩沖液（稀釋液）。

7. 將10 ?l試驗抑制劑添加到指定的“試驗抑制劑”孔中。

8. 將10 ?l稀釋液添加到“陽性對照”和“陰性對照”孔中。

9. 將Amplex? Red用蒸餾水稀釋10倍。

10. 向所有孔中添加10 ?l稀釋后的Amplex? Red。

11. 在玻璃瓶中準備花生四烯酸（未提供），12. 向所有孔中添加10 ?l 0.5 mM花生四烯酸。

13. 立即在熒光讀數器中讀取樣品的熒光強度（激發波長 = 535 nm；發射波長 = 590 nm）。

COX1抑制劑篩選檢測試劑盒示例結果：

在濃度增加的SC-560（Tocris#1550）存在下測量COX1活性

COX1抑制劑篩選檢測試劑盒文獻參考：

Zaragoza C., et al., 2022 Molecules 27(3):1146.

Bruno A., et al., 2023 Adv Pharmacol 97:133-165.

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