BPS Bioscience CD36 HEK293 細胞系-78526-H：表達人CD36的穩定克隆細胞

CD36 HEK293細胞系是一種穩定表達全長人類CD36的克隆HEK293細胞系。與親本HEK293細胞系相比，選擇了兩種細胞系，分別具有中等和高水平的CD36表達。

背景

CD36（分化簇36）也被稱為血小板糖蛋白4、脂肪酸轉運蛋白（FAT）、清道夫受體B類成員3（SCARB3）和糖蛋白88（GP88）。它在許多細胞類型中表達，包括紅細胞、單核細胞、分化的脂肪細胞、骨骼肌細胞、乳腺和腸道上皮細胞以及內皮細胞。CD36是血小板表面存在的主要糖蛋白之一。

CD36具有復雜的生物學功能，這取決于細胞類型和配體。CD36是基質蛋白（如膠原蛋白、纖維連接蛋白和血小板反應蛋白）的糖蛋白受體，作為粘附分子。它與血小板反應蛋白的結合有助于血管生物學和血管生成，并且它還結合脂質，如氧化磷脂和低密度脂蛋白、脂蛋白和長鏈脂肪酸。配體誘導的CD36簇的形成啟動了信號轉導和受體-配體復合物的內化。CD36通過將脂質配體導入細胞內，并通過促進細胞對長鏈脂肪酸的攝取，調節細胞的脂肪酸代謝，從而參與肌肉代謝、脂肪細胞中的能量儲存以及腸道中膳食脂肪的處理。

CD36涉及多種涉及免疫和血管系統的疾病，以及脂質代謝重要的疾病，如糖尿病和肥胖、炎癥、動脈粥樣硬化、心臟病和阿爾茨海默病。此外，由于脂質是腫瘤細胞的重要能量來源，CD36與癌癥相關。因此，在多種癌癥類型中觀察到CD36表達上調，并與不良臨床結果相關。最后，它通過介導由寄生蟲引起的疾病，瘧原蟲（Plasmodium falciparum）感染的紅細胞的粘附能力，在瘧疾中發揮作用。

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應用

? 對抗CD36的抗體的特性鑒定。

? 篩選抑制劑或中和抗體對CD36的結合。

細胞培養協議

細胞復蘇

1. 從液氮儲存中取出細胞瓶。在準備解凍前，將其保持在干冰上。

2. 準備解凍時，將裝有冷凍細胞的瓶子在37°C水浴中旋轉大約60秒。一旦細胞解凍（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將瓶內的全部內容轉移到一個空的50毫升錐形管中。

注意：在37°C水浴中放置細胞時間過長會導致細胞活力迅速下降。

3. 使用10毫升血清移液管，緩慢向含有細胞的錐形管中加入10毫升預熱的解凍培養基1。解凍培養基1應逐滴加入，同時輕輕搖動錐形管以實現溫和混合，避免滲透沖擊。

4. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并將細胞在5毫升預熱的解凍培養基1中重懸。

5. 將重懸的細胞轉移到T25或T75培養瓶中，并在37°C、5% CO2培養箱中培養。

6. 培養24小時后，檢查細胞附著和活力。更換為新鮮的解凍培養基1，并繼續在37°C、5% CO2培養箱中培養，直到細胞準備好分裂。

7. 在細胞完全融合之前應進行傳代。在第一次傳代及后續傳代中，使用生長培養基1V。

細胞傳代

1. 吸去培養基，用不含Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌細胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基1V并轉移到管中。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并將細胞在生長培養基1V中重懸。

4. 按推薦的亞培養比例1:6至1:8每周或每周兩次播種到新的培養容器中。

細胞冷凍

1. 吸去培養基，用不含Ca2+/Mg2+的PBS洗滌細胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基1V并計數細胞。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并將細胞在4°C細胞冷凍培養基（BPS Bioscience #79796）中重懸，濃度約為2 x 10^6細胞/毫升。

4. 將1毫升細胞懸液分配到每個冷凍管中。將管放入絕緣容器中進行慢速冷卻，并在-80°C下過夜儲存。

5. 次日將管轉移到液氮中進行長期儲存。

注意：建議在早期傳代擴展細胞并至少冷凍10個管以備將來使用。

圖1：CD36 HEK293細胞系中CD36的細胞表面表達。

一百萬個細胞用5微升PE偶聯的抗CD36抗體（BioLegend #336206）在冰上染色30分鐘，洗滌三次，并通過流式細胞儀分析。CD36 HEK293細胞系高表達細胞（藍色）和中等表達細胞（紅色）與親本HEK293細胞（綠色）進行比較。Y軸代表細胞計數。X軸表示PE強度。

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商，公司一直致力于開發藥物研發領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創立，從創立至今一直致力于提供藥物研發領域的創新解決方案，以推動新的藥物發現。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、新型冠狀病毒、CRISPR、細胞信號轉導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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