BPS Bioscience Anti-H3K36me1多克隆抗體-反應測試結果分析

以兔為宿主制備的針對含有單甲基化賴氨酸36（H3K36me1）的組蛋白H3的多克隆抗體，使用KLH偶聯的合成肽作為免疫原。

作為BPS Bioscience在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience熱銷產品Anti-H3K36me1多克隆抗體。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Anti-H3K36me1多克隆抗體：

克隆性：多克隆

宿主物種/表達系統：兔

純化方法：親和純化

形式：水溶液

配方：含有0.05%疊氮化物和0.05% ProClin 300的PBS緩沖液

濃度：50 ?g/54 ?l

免疫原：合成肽

儲存/穩定性

在-80°C下可保存長達2年。首次解凍后離心以最大化產品回收。分裝以避免反復凍融。分裝后可在-20°C下保存至少一個月。

染色質免疫沉淀（ChIP）實驗結果

使用人骨肉瘤（U2OS）細胞、針對H3K36me1的抗體（產品編號25246）和優化的qPCR引物對進行ChIP實驗。實驗使用了150萬細胞的剪切染色質，并采用嚴格的洗滌條件?？贵w用量梯度為1、2、5和10 ?g/次ChIP實驗，并進行了分析。以1 ?g/IP的IgG作為陰性免疫沉淀對照。定量PCR使用了組成性表達基因GAPDH的啟動子引物和非活性基因MYOD的引物。

為了測定抗體滴度，使用針對H3K36me1的抗體（產品編號25246）、粗提血清和流穿液進行ELISA實驗，抗體進行梯度稀釋。使用的抗原是含有目標組蛋白修飾的肽段。通過繪制吸光度與抗體稀釋度的關系圖，估計抗體的滴度為1:46,000。

交叉反應性測試

使用針對H3K36me1的抗體（產品編號25246）進行點雜交分析，測試其與其他修飾的組蛋白H3肽段或未修飾的H3K36序列的交叉反應性。將含有相應組蛋白修飾的肽段（100至0.2 pmol）點在膜上，抗體稀釋度為1:20,000。圖3顯示抗體對目標修飾具有高特異性。

Western Blot分析

使用針對H3K36me1的抗體（產品編號25246），對HeLa細胞的組蛋白提取物（15 ?g）進行Western Blot分析?？贵w在含有5%脫脂奶粉的TBS-Tween中稀釋1:1000。右側標記了目標蛋白的位置，左側顯示了分子量標記（單位：kDa）。

免疫熒光分析

人骨肉瘤（U2OS）細胞用針對H3K36me1的抗體（產品編號25246）和DAPI進行染色。細胞用4%甲醛固定20分鐘，并用含有5%正常山羊血清的PBS/TX-100進行封閉。

圖A：細胞用H3K36me1抗體（左側）在封閉液中稀釋1:500進行免疫熒光標記，隨后用與Alexa568偶聯的抗兔抗體進行二抗標記，或用DAPI（右側）標記，特異性標記DNA。

圖B、C、D和E：分別在抗體與含有未修飾的H3K36以及單甲基化、二甲基化和三甲基化H3K36的阻斷肽孵育后，用H3K36me1抗體對細胞進行染色。

應用

ChIP（5 - 10 ?g）

ELISA（1:100）

點雜交（1:20,000）

Western Blot（1:1000）

免疫熒光（1:500）

運輸溫度：-20°C或-80°C

物種反應性：人

備注：每次免疫沉淀的抗體最佳用量應由終端用戶確定。建議測試5 - 10 ?g/次。

注意事項：避免反復凍融。

科學分類：抗體

監管狀態：僅限研究使用

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商，公司一直致力于開發藥物研發領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創立，從創立至今一直致力于提供藥物研發領域的創新解決方案，以推動新的藥物發現a。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、新型冠狀病毒、CRISPR、細胞信號轉導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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