BPS Bioscience Anti-H3K27ac多克隆抗體-染色質免疫沉淀（ChIP）實驗結果

在兔體內產生的針對組蛋白H3的多克隆抗體，使用KLH偶聯的合成肽在賴氨酸27（H3K27ac）處乙?；?。

作為BPS Bioscience在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience熱銷產品Anti-H3K27ac多克隆抗體。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Anti-H3K27ac多克隆抗體：

克隆性：多克隆

宿主物種/表達系統：兔

純化方法：親和純化

形式：水溶液

配方：含有0.05%疊氮化物和0.05% ProClin 300的PBS緩沖液

濃度：50 ?g/42 ?l

免疫原：合成肽

儲存/穩定性

在-80°C下可保存長達2年。首次解凍后離心以最大化產品回收。分裝以避免反復凍融。分裝后可在-20°C下保存至少一個月。

染色質免疫沉淀（ChIP）實驗結果

使用針對H3K27ac的抗體（產品編號25239）和優化的qPCR引物組合，在HeLa細胞中進行ChIP實驗。實驗使用了100萬細胞的剪切染色質?？贵w用量梯度為1、2、5和10 ?g/次ChIP實驗，并進行了分析。以2 ?g/IP的IgG作為陰性免疫沉淀對照。定量PCR使用了活性基因ACTB和EIF4A2的啟動子引物作為陽性對照，以及非活性基因MYT1和TSH2B的編碼區引物作為陰性對照。圖1顯示了回收率，以輸入量的百分比表示（免疫沉淀DNA與輸入DNA的相對量，經qPCR分析后得出）。這些結果與H3K27乙酰化富集于活性基因啟動子區域的觀察結果一致。

ChIP-seq實驗結果

使用2 ?g針對H3K27ac的抗體（產品編號25239），在100萬HeLaS3細胞的剪切染色質上進行ChIP實驗。定量PCR使用了活性基因ACTB和EIF4A2的啟動子引物作為陽性對照，以及非活性基因MYT1和MB的編碼區引物作為陰性對照（圖2A）。隨后，免疫沉淀的DNA在Illumina基因組分析儀上進行分析。文庫制備、簇生成和測序均按照制造商說明進行。36 bp的標簽通過ELAND算法與人類基因組比對。圖2B顯示了沿完整X染色體的峰分布，以及圍繞ACTB和EIF4A2陽性對照基因的兩個區域的分布（圖2C和D）。

抗體滴度測定

為了測定抗體滴度，使用針對H3K27ac的抗體（產品編號25239）在抗原包被的孔中進行ELISA實驗，抗體進行梯度稀釋。使用的抗原是含有目標組蛋白修飾的肽段。通過繪制吸光度與抗體稀釋度的關系圖（圖3），估計抗體滴度為1:4000。

點雜交分析

使用針對H3K27ac的抗體（產品編號25239）進行點雜交分析，測試其與其他組蛋白修飾肽段以及未修飾的H3K27序列的交叉反應性。將100至0.2 pmol的相應肽段點在膜上，抗體稀釋度為1:25000。圖4顯示抗體對目標修飾具有高特異性。

Western Blot分析

使用針對H3K27ac的抗體（產品編號25239），對HeLa細胞的全細胞裂解物（40 ?g，泳道1）和組蛋白提取物（15 ?g，泳道2），以及1 ?g的重組組蛋白H2A、H2B、H3和H4（分別對應泳道3、4、5和6）進行Western Blot分析。抗體在含有5%脫脂奶粉的TBS-Tween中稀釋1:1000。右側標記了目標蛋白的位置，左側顯示了分子量標記（單位：kDa）。

免疫熒光分析

HeLa細胞用針對H3K27ac的抗體（產品編號25239）和DAPI進行染色。細胞用4%甲醛固定10分鐘，并用含有5%正常山羊血清和1% BSA的PBS/TX-100進行封閉。細胞用H3K27ac抗體（左側）在封閉液中稀釋1:500進行免疫熒光標記，隨后用與Alexa488偶聯的抗兔抗體進行二抗標記。中間圖顯示了DAPI對細胞核的染色。右側圖顯示了兩種染色的合并圖像。

應用

ChIP/ChIP-seq（1 - 2 ?g/ChIP）

ELISA（1:100）

點雜交（1:25000）

Western Blot（1:1000）

免疫熒光（1:500）

運輸溫度：-20°C或-80°C

物種反應性：人

備注：每次免疫沉淀的抗體最佳用量應由終端用戶確定。建議測試1 - 5 ?g/次。

注意事項：避免反復凍融。

科學分類：抗體

監管狀態：僅限研究使用

產品數據庫：

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商，公司一直致力于開發藥物研發領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創立，從創立至今一直致力于提供藥物研發領域的創新解決方案，以推動新的藥物發現a。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、新型冠狀病毒、CRISPR、細胞信號轉導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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