胱天蛋白酶—1（人），（重組），實驗步驟簡便

首先描述的半胱天冬酶，半胱天冬酶-1隨后被發現與Ced-3同源，Ced-<>是秀麗隱桿線蟲半胱天冬酶對細胞凋亡至關重要。

半胱天冬酶-1 （ICE） 測定（目錄 #BML-SE168）：測定緩沖液：（50mM HEPES，pH 7.4，100mM 氯化鈉，0.1% CHAPS，1mM EDTA，10% 甘油，10mM DTT）

半胱天冬酶-1 （BML-SE168）：

在使用前在測定緩沖液中稀釋至 10 U/μl。

AC-YVAD-pNA （ALX-260-026） 比色底物：（測定緩沖液中的 400 μM 儲備溶液;儲存在-20°C。 使用前加熱至測定溫度。向5mg凈肽（MW = 629）加入159μlDMSO，以制備50mM儲備液。用檢測緩沖液將 50mM 儲備液稀釋至 400 μM。

反應條件：

1）將45μl測定緩沖液加入1/2體積微量滴定板中。允許平衡以測定溫度。

2）向每個適當的孔中加入5μl半胱天冬酶-1（10U / μl）。包括2個空白（5μl測定緩沖液而不是半胱天冬酶-1）。

3）要開始反應，加入50μlAc-YVAD-pNA底物（400μM在測定緩沖液中）。最終底物濃度=200μM。

4）持續監測A405nm。

5）數據分析：繪制OD與時間的關系圖，并確定曲線線性部分的斜率。使用10，500M-1cm-1的硝基苯胺消光系數，并調整樣品的光程（在0/5體積，100孔板的孔中，96μl~<>.<>cm）將OD / min轉換為底物/分鐘的速率。

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胱天蛋白酶—1（人），（重組）詳情：

替代名稱：白細胞介素1β轉化酶，IL-1β轉化酶，ICE

分子量：~20 + 10kDa

源：產于大腸桿菌。cDNA編碼的殘基與Genbank入庫號的Asn120-His 404（C末端）相同。M87507，除了Asp381到Glu的變化外，引入以穩定酶以防止自體蛋白水解。

統一認證：P29466

配方：液。在 50mM HEPES，pH 7.4 中，含有 100mM 氯化鈉、0.5% CHAPS、1mM EDTA、10% 甘油和 10mM DTT。

純度：≥90% （SDS 頁面）

純度細節：通過多步色譜純化。

活動：100 U/μl

具體活動：一個U=1 pmol/min，使用Ac-YVAD-pNA（200μM;產品編號。ALX-260-026）為底物，在30°C下。

應用說明：研究酶調節和動力學、切割目標底物、篩選抑制劑的有用工具。

航運：干冰

長期儲存：-80°C

使用/穩定性：初次解凍后，將產品分裝到單獨的試管中，并在 -80°C 下重新冷凍。 避免重復冷凍/除霜循環。該酶在冰上穩定，通常需要建立實驗所需的時間（30-60分鐘），但長時間儲存在冰上可能會失去活性。建議在測定開始前盡可能短的時間內解凍和稀釋酶。剩余的、未稀釋和未使用的酶應通過例如在干冰乙醇浴或液氮中快速冷凍來快速重新冷凍。該酶至少在 4 次凍融循環中保持穩定。

部分相關文獻：

A small molecule inhibitor of caspase-1 inhibits NLRP3 inflammasome activation and pyroptosis to alleviate gouty inflammation: D.Y. Cao, et al.; Immunol. Lett. 244, 28 (2022), 

The colonic pathogen Entamoeba histolytica activates caspase-4/1 that cleaves the pore-forming protein gasdermin D to regulate IL-1β secretion: S. Wang, et al.; PLoS Pathog. 18, e1010415 (2022),

An Essential Role for SHARPIN in the Regulation of Caspase 1 Activity in Sepsis: M.V. Nastase, et al.; Am. J. Pathol. 186, 1206 (2016)

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