Biogradetech 膠原酶，1 型（Collagenase）在細胞分離和組織工程中的多效性應用

粗制膠原酶制劑包含兩種不同膠原酶的幾種同工酶、一種巰基蛋白酶、氯鏈蛋白酶、一種類似胰蛋白酶的酶和一種氨肽酶。這種膠原酶和蛋白酶活性的組合在分解細胞間基質方面非常有效，這是組織解離的關鍵部分。該復合物的一個組成部分是一種水解酶，它優先在天然膠原的螺旋區域中降解，特別是在序列Pro-Y-Gly-Pro中的Y-Gly鍵，其中YZ常是一種中性氨基酸。這種裂解產生的產品容易進一步被肽酶消化。粗制膠原酶被金屬螯合劑如半胱氨酸、EDTA或鄰苯二酚抑制，但不被DFP抑制。它也被α2-巨球蛋白，一種大型血漿糖蛋白抑制。酶活性需要Ca2+。每種膠原酶特有的酶譜已與用于研究的細胞來源的組織（或細胞的使用目的）相關聯，因此通過相關性已建立了幾種類型的粗制膠原酶：類型1、2、3和4。

- 類型1粗制膠原酶具有原始的膠原酶、酪蛋白酶、氯鏈蛋白酶和胰蛋白酶活性的平衡。

- 類型2含有較高相對水平的蛋白酶活性，特別是氯鏈蛋白酶。

- 類型3含有Z低水平的次級蛋白酶。

- 類型4設計為特別低的胰蛋白酶活性，以限制對膜蛋白和受體的損傷。

- 類型5含有更高的膠原酶和酪蛋白酶值。

- 類型6含有高膠原酶活性，酪蛋白酶與膠原酶的比例約為2:1。設計為相對于類型I（col G）膠原酶，富含類型II（col H）膠原酶。

- 類型7含有比類型1和2膠原酶高四倍的膠原酶和酪蛋白酶活性。

- 純化膠原酶，代碼：CLSPA，含有Z少的次級蛋白水解活性以及高膠原酶活性。

無動物源類型AFA、AFB和AFC，STZ1和STZ2膠原酶是從完全不含動物成分的培養基中培養出來的，設計用于生物加工應用，其中必須防止潛在的動物源性病原體的引入。次級蛋白酶的水平與類型1和2膠原酶相似。

- CLSAFA是原始的AFA等級，設計為具有與類型1和2膠原酶相似的膠原酶和次級蛋白酶。

- CLSAFB含有比CLSAFA更高的膠原酶和酪蛋白酶活性。

- CLSAFC具有類似于類型4膠原酶的特別低的胰蛋白酶活性。

- CLSAFD含有比CLSAFA高兩到三倍的特定活性。

- 純化膠原酶，代碼CLSAFP含有Z少的次級蛋白水解活性以及高膠原酶活性。

- STZ1和STZ2，0.22μ過濾STEMxyme AOF膠原酶/中性蛋白酶（Dispase）混合物，用于原代細胞和干細胞的分離。

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膠原酶測定是Mandl的改良方法，其中膠原酶與天然膠原共同孵育五小時，然后使用Moore和Stein, JBC, 176, 367, (1948)比色法硝基羥基吲哚法確定膠原分解的程度。釋放的氨基酸以膠原酶每毫克微摩爾亮氨酸表示。

膠原酶，1 型（Collagenase）用途：

粗制膠原酶廣泛用于酶促原代細胞分離和組織解離程序。大多數研究者使用如類型1、2、3和4的粗制膠原酶制劑，或者色譜純化的膠原酶；后者通常與彈性酶、透明質酸酶等次級酶結合使用。為了獲得Z佳結果，必須將蛋白水解活性的精確混合物定制到要解離的組織。類型與不同組織的有效性之間的相關性一直很好，但并不完美，可能部分取決于使用參數、目標以及批次間變化。

文獻參考：

Adams, E. , Antoine, S. and Golstein, A.

Collagenase Action on the Synthetic Tripeptide Polymers, (Gly-Pro-Ala)n and (Gly-Ala-Pro)n , Biochim Biophys Acta 185 , 251 , 1969

Ala-aho, R. and Kahari, V.

Collagenases in Cancer , Biochimie 87 , 273 , 2005

Amsterdam, A. and Jamieson, J.

Studies on Dispersed Pancreatic Exocrine Cells. II. Functional Characteristics of Separated Cells , J Cell Biol 63 , 1057 , 1974

An Editorial.

Collagenase and Rheumatoid Arthritis , N Engl J Med 279 , 942 , 1968

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