DPP4抑制劑篩選試劑盒的性能特征介紹和示例

Biogradetech-DPP4抑制劑篩選試劑盒（BGT-KAT-100）提供了一種方便的基于熒光的方法來篩選DPP（Ⅳ）抑制劑。該測定使用熒光底物Gly-Pro氨基甲基香豆素（AMC）來測量DPP（IV）的活性。DPP對肽鍵的切割釋放出游離的AMC基團，產生的熒光可以使用350-360nm的激發波長和450-465nm的發射波長進行分析。

艾美捷DPP4抑制劑篩選試劑盒特點：

1、篩選DPP (IV)抑制劑

2、可對46個樣本進行雙重測定

3、包含陽性對照抑制劑

4、基于板的熒光測量（激發波長530-540納米，發射波長585-595納米）

DPP4抑制劑篩選試劑盒性能特征：

Z'因子是一個用來描述檢測方法穩健性的術語，它是通過使用下面的公式計算得出的。

Z? = 1 -（3σc+ + 3σc-）/丨?c+ - ?c-丨

Where σ: Standard deviation

?: Mean

c+: Posive control

c-: Negative control

Z'因子的理論上限為1.0。一個穩健的檢測方法其Z'因子應大于0.5。Cayman的DPP (IV)抑制劑篩選試劑盒的Z'因子被確定為0.96。

DPP4抑制劑篩選試劑盒示例數據：

DPP (IV)抑制劑篩選試劑盒的典型Z'數據。數據顯示了按照試劑盒手冊中描述準備的陽性和陰性對照孔的數據。此次實驗計算出的Z'因子為0.96。紅色線條對應于每個對照值的平均值偏差的三個標準差。

基本信息：

1、所有孔的最終檢測體積為100微升。

2、在檢測中使用稀釋后的檢測緩沖液。

3、除了酶之外，所有試劑在開始檢測前必須平衡至室溫。

4、沒有必要一次使用板上的所有孔。

5、建議以三重復進行樣本檢測，但是否這樣做取決于用戶的判斷。

6、檢測在37°C下進行。

7、如果不知道適當的抑制劑濃度，可能需要在幾個稀釋度下進行檢測?？梢赃M行每個抑制劑的稀釋系列，以確定IC50值。

8、三十個抑制劑樣本可以進行三重復檢測，或者四十五個樣本進行雙重復檢測。

9、使用激發波長為350-360納米和發射波長為450-465納米的熒光監測。

執行檢測：

1.初始活性孔 - 在三個孔中分別加入30微升稀釋的檢測緩沖液、10微升稀釋的DPP (IV)和10微升溶劑（用于溶解抑制劑的相同溶劑）。

2.背景孔 - 在三個孔中分別加入40微升稀釋的檢測緩沖液和10微升溶劑（用于溶解抑制劑的相同溶劑）。

3.西他列汀陽性對照抑制劑孔 - 在三個孔中分別加入30微升稀釋的檢測緩沖液、10微升稀釋的DPP和10微升西他列汀陽性對照抑制劑。

4.抑制劑孔 - 在三個孔中分別加入30微升稀釋的檢測緩沖液、10微升稀釋的DPP (IV)和10微升抑制劑。注意：抑制劑可以溶解在檢測緩沖液或二甲亞砜中，并且應以10微升的最終體積加入到檢測中。乙醇和甲醇會大幅降低酶活性，因此不推薦用于溶解抑制劑。如果完全不知道需要抑制DPP (IV)的適當濃度，我們建議檢測該化合物的幾個濃度。

5.啟動反應 - 向所有使用的孔中各加入50微升稀釋的底物溶液。

6.蓋板孵育 - 用板蓋蓋住板子，并在37°C下孵育30分鐘。

7. 讀取熒光 - 去掉板蓋，并使用激發波長為350-360納米和發射波長為450-465納米的熒光讀取?？赡苄枰{整儀器的增益設置，以便測量所有樣本。

*為了確定反應速率和表觀IC50值，我們建議以動力學方式讀取樣本，在30分鐘檢測讀取時間內收集盡可能多的時間點。基于動力學曲線的線性部分確定初始速率。可以通過用熒光代替，按照以下所示進行計算。

% Inhibition =【{Inial Acvity - Inhibitor}/ Inial Acvity 】x 100