Agrisera Anti-Halo Tag，來源于Rhodococcus rhodochrous的DhaA的方案解析

HaloTag來源于紅球菌的鹵代烷脫鹵酶DhaA，可以摻入感興趣的蛋白質（POI），促進細胞和生化分析。HaloTag?是Promega Corporation的商標。

作為Agrisera全國總代理，艾美捷科技強烈推薦Agrisera熱銷產品Anti-Halo Tag，來源于Rhodococcus rhodochrous的DhaA。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Anti-Halo Tag，來源于Rhodococcus rhodochrous的DhaA：

免疫原：來自紅色諾卡氏菌（Rhodococcus rhodochrous）的DhaA，被稱為HaloTag?的KLH偶聯肽。

宿主：兔

克隆性：多克隆

純度：抗原親和純化血清，在PBS pH 7.4中

格式：凍干

數量：50 微克

復溶：復溶時加入50 微升無菌或去離子水。

儲存：凍干/復溶后儲存于-20°C；一旦復溶，請分裝以避免反復凍融。請記住，在打開管子前短暫離心以避免由于凍干物質粘附在管蓋或管壁上而造成的任何損失。

測試應用：西方印跡（WB）

推薦稀釋度：1:1000（WB）

確認反應性：帶有HaloTag?的重組蛋白

預測反應性：帶有HaloTag?的重組蛋白

樣本：

1. 梯度（PageRuler Prestained, 10至180 kDa - Thermo）

2. 未誘導的細菌

3. 在37°C下誘導3小時的細菌

4. 超聲裂解后（裂解液）上清液的分裝

5. 與珠子孵育后的流穿

6. 用酸性洗脫緩沖液洗脫1次

7. 用酸性洗脫緩沖液洗脫2次

8. 用2倍SDS樣品緩沖液洗脫珠子

重組蛋白是從25毫升在37°C下誘導3小時的大腸桿菌Rossetta細菌中純化的。超聲裂解培養物（裂解液）后，將Halo-Trap瓊脂糖珠子（chromotek）加入上清液并在4°C下孵育1小時。經過3次洗滌后，用酸性緩沖液（x2）和50微升Laemmli 2X洗脫珠子。然后將樣本在12% SDS-PAGE上分離，并濕轉移至0.45微米孔徑的硝酸纖維素上，轉移時間為1小時。用5%牛奶封閉印跡2小時/室溫下攪拌。用1:1000稀釋的初級抗體在5%牛奶TBS-T中過夜/4°C下攪拌。倒掉抗體溶液后，用TBS-T在室溫下攪拌4次，每次5分鐘。用二級抗體（AS09 602，兔抗鼠IgG，HRP偶聯）稀釋至1:20000，在5%牛奶中1小時/室溫下攪拌。如上所述洗滌印跡，并用AS16 ECL-S-10，AgriSeraBright化學發光檢測試劑顯影。曝光時間為30秒。

感謝法國IBPS種子生物學隊的Paul Schouvelier

相關產品：

山羊抗兔IgG（H&L），HRP偶聯

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抗HSV表位標簽

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