BirA(突變/TurboID)：助力免疫熒光與Western Blot研究

用TurboID標記蛋白質可以研究不同類型細胞、器官和發育階段的蛋白質相互作用。這是Mair等人（2019）所述的接近標記實驗的合適工具。TurboID實現了擬南芥蛋白質復合物和細胞類型特異性細胞器蛋白質組的接近標記。Elife。2019年9月19日；8:e47864。doi:10.7554/eLife.47864。

艾美捷BirA(突變/TurboID)：

貨號：AS20-4440

免疫原：重組突變型BirA蛋白，來源于大腸桿菌，使用以下質粒生產：TurboID-His6_pET21a（質粒編號#107177）。該蛋白在載體中表達，允許生成無His6標簽的非標記蛋白。

宿主：兔子

克隆性：多克隆

純度：免疫原親和純化的血清，溶于pH 7.4的磷酸鹽緩沖液（PBS）中。

形式：凍干

數量：50 ?g

復溶：復溶時加入50 ?l無菌水。

儲存：凍干品/復溶后儲存于-20°C；復溶后請分裝保存，避免反復凍融。打開前請短暫離心管子，以避免因物質粘附在管蓋或管壁上而導致的損失。

測試應用：免疫熒光（IF）、西方印跡（WB）

推薦稀釋度：1:5000（WB）

預期 | 表觀分子量：35 kDa

確認的反應性：BirA（突變型/TurboID）

預測的反應性：mini TurboID

未反應的：目前尚未發現與預測反應性不符的已知例外。

應用舉例：

樣品信息：

1-20 ?g擬南芥野生型Col-0（陰性對照）

2-20 ?g表達POI-TurboID融合蛋白的擬南芥（獨立株系1）

3-20 ?g表達POI-TurboID融合蛋白的擬南芥（獨立株系2）

4-20 ?g表達POI-TurboID融合蛋白的擬南芥（獨立株系3）

5-10 ng純化的TurboID（陽性對照）

實驗方法：

從擬南芥葉片材料中提取20 ?g總蛋白，提取緩沖液為稀釋的HENS（25 mM HEPES，pH 7.7；1 mM EDTA；2.5% SDS），并儲存于-80°C。樣品在95°C下用1x蛋白上樣緩沖液（0.5%十二烷基硫酸鈉、0.002%溴酚藍、10%甘油、50 mM Tris-HCl，pH 6.8）變性5分鐘。樣品在4-16%梯度SDS-PAGE凝膠上分離，并通過半干法轉印至硝酸纖維素膜（孔徑0.45 ?m），轉印時間為1小時。膜在4°C下用5%脫脂奶粉（TBS-T）封閉過夜，期間不攪拌。膜在4°C下用TBS-T稀釋至1:5000的一抗孵育過夜，期間不攪拌。棄去抗體溶液后，膜用TBS-T快速沖洗，隨后在室溫下用TBS-T洗滌三次，每次10分鐘，期間攪拌。膜在室溫下用AGRISE

BirA(突變/TurboID)文獻參考：

Persyn et al. (2024).A Nitrogen-Specific Interactome Analysis Sheds Light on the Role of the SnRK1 and TOR Kinases in Plant Nitrogen Signaling. Mol Cell Proteomics. 100842. doi: 10.1016/j.mcpro.2024.100842.   

Liu et al. (2024). Activation of kappa opioid receptor suppresses post-traumatic osteoarthritis via sequestering STAT3 on the plasma membrane. Cell Commun Signal. 2024 Jun 18;22(1):335.doi: 10.1186/s12964-024-01709-4.  

Medica et al. (2023). Proximity-dependent mapping of the HCMV US28 interactome identifies RhoGEF signaling as a requirement for efficient viral reactivation. PLoS Pathog. 2023 Oct 2;19(10):e1011682.doi: 10.1371/journal.ppat.1011682.

Shi et al. (2023). Protocol to identify protein-protein interaction networks in Solanum tuberosum using transient TurboID-based proximity labeling. STAR Protoc. 2023 Sep 20;4(4):102577.doi: 10.1016/j.xpro.2023.102577.