Jena Bioscience 3 '-末端寡核苷酸標記試劑盒在分子生物學中的應用

3'-末端寡核苷酸標記試劑盒包含了進行DNA寡核苷酸（長度：20 - 100 bp，每反應5 pmol）高效3'-末端標記所需的所有緩沖液和試劑，唯獨不包括待標記的寡核苷酸模板和標記核苷酸。標記原理基于末端脫氧核苷酸轉移酶（TdT），它能在CoCl2存在的條件下，非依賴模板地將標記核苷酸轉移到單鏈DNA（例如一個寡核苷酸）的3'-OH基團上。核苷酸的數量，從而標記的結合，取決于核苷酸的類型（UTP/ddUTP）以及標記的類型。標記的UTP：平均1至3個標記；標記的dUTP：多重標記（尾部長度高度依賴于核苷酸特異性）；標記的ddUTPs：1個標記。所得的3'-末端標記寡核苷酸非常適合用于涉及序列特異性蛋白結合或雜交的應用，如電泳遷移率變化分析（EMSA）、Northern或Southern印跡。與內部隨機標記的探針相比，標記僅位于3'-末端，不太可能干擾探針的結合。TdT對單鏈DNA（ssDNA）有偏好，相對于具有3'-懸垂或平端的雙鏈DNA（dsDNA）。為了制備標記的dsDNA復合物，應分別標記每個互補的寡核苷酸，并在使用前退火它們。

作為Jena Bioscience在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦Jena Bioscience 3 '-末端寡核苷酸標記試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

組成：

末端脫氧核苷酸轉移酶（TdT）：

- TdT酶：30 μl（每μl含20 U），溶于100 mM醋酸鉀（pH 6.8）、2 mM 2-巰基乙醇、0.01% Triton X-100（體積比）以及50%甘油（體積比）。

- 5倍TdT反應緩沖液：400 μl，包含1 M醋酸鉀肼（pH 7.2）、0.125 M Tris、0.05% Triton X-100（體積比）、5 mM氯化鈷（CoCl?）。

- 未標記對照寡核苷酸（60 bp）：250 μl，1 μM，溶于1倍TE緩沖液，pH 7.6。

- PCR級水：12.5 ml。

- 1倍TE緩沖液，pH 7.6：100 ml，包含10 mM Tris-HCl和1 mM EDTA。

- 終止緩沖液：400 μl，0.5 M EDTA溶液，pH 8。

運輸：放置在凝膠包裝中運輸。

儲存條件：存儲于-20°C。

附加儲存條件：避免凍融循環。

保質期：12個月。

1. 3' 末端寡核苷酸標記反應

- 除了TdT之外，將所有組分存放在冰上直至使用。

- 將TdT存放在-20°C直至使用。

- 最終測定體積：50 ?l

- 模板要求：通過HPLC或凝膠電泳純化的寡核苷酸/單鏈DNA，長度為20 – 100 bp。

- 按照下面列出的順序在冰上添加所有組分。

- 通過輕輕上下吸液的方式混合反應，不要渦旋混合！

- 在37°C下孵育30分鐘。

- 添加1 ?l終止緩沖液（0.5 M EDTA溶液，pH 8）以停止每個反應。

- 將反應存放在冰上以備后續使用（見3.）或在-20°C下長期保存。

Jena Bioscience的主要產品包括核苷/核酸制品系列（包括合成的類似物）、重組蛋白及蛋白表達系統、點擊化學產品系列、在結構學研究方面全面提供晶體篩選試劑盒、優化試劑、工具和各類耗材等。此外，還提供分子生物學和生物化學研究的定制試劑與研究服務。

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