Jena Bioscience 地高辛配基-11-ddUTP標記DIG 3 '-末端寡核苷酸試劑盒特異性研究

含地高辛-11-ddUTP的DIG 3'-末端寡核苷酸標記試劑盒包含DNA寡核苷酸有效3'-末端地高辛化所需的所有試劑（待標記的寡核苷酸模板和地高辛檢測材料除外）（長度：20-100bp，每次反應5pmol）。標記原理基于末端脫氧核苷酸轉移酶（TdT），其在CoCl2存在下模板獨立地將1Digoxigenin-11-ddUTP轉移到ssDNA的3'-OH基團（例如寡核苷酸）。它和第二代（羅氏）DIG寡核苷酸3'-末端DNA標記試劑盒的原理相似。所得到的3’-末端脫氧寡核苷酸非常適合涉及序列特異性蛋白質結合或雜交的應用，如EMSA、Northern或Southern印跡。與內部隨機的地高辛化探針相比，地高辛僅位于3'-端，不太可能干擾探針結合。TdT優先選擇單鏈DNA（ssDNA），而不是具有3’-懸垂或鈍端的dsDNA。為了制備標記的dsDNA復合物，分別標記每個互補的寡核苷酸，并在使用前對其進行退火

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組成：

末端脫氧核苷酸轉移酶（Tdt）

30μl（20 U/μl）溶于100 mM乙酸鉀（pH 6.8）中，2 mM 2-

巰基乙醇、0.01%Triton X-100（v/v）和50%甘油（v/v

5x TdT反應緩沖液

400μl，含1M二碳酸鉀、0.125M Tris、0.05%TritonX-100（v/v）、5mM CoCl?,pH 72

地高辛-11-ddUTP25μl（1mM）

未標記對照寡核苷酸（60 bp）250μl，1μM，1x TE緩沖液，pH Z.6

3'-地高辛標記的對照寡核苷酸（60 bp）130μl，1μM，在1x TE緩沖液中，pH Z.6

PCR等級H?O

12.5毫升

1x TE緩沖液，pH 76100 ml，含有10 mM Tris-HCl、1 mM EDTA，pH 7.6

停止緩沖區

400μl，0.5 M EDTA溶液，pH 8

運輸：用凝膠包裝運輸

儲存條件：在-20°C下儲存

其他儲存條件：避免冷凍/解凍循環

保質期：12個月

Jena Bioscience的主要產品包括核苷/核酸制品系列（包括合成的類似物）、重組蛋白及蛋白表達系統、點擊化學產品系列、在結構學研究方面全面提供晶體篩選試劑盒、優化試劑、工具和各類耗材等。此外，還提供分子生物學和生物化學研究的定制試劑與研究服務。

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