ALPCO高靈敏度促甲狀腺激素(大鼠)ELISA(96孔)檢測方案

甲狀腺刺激激素（也稱為促甲狀腺激素或TSH）是由前腦垂體腺產生的糖蛋白。它通過作用于甲狀腺，維持碘甲狀腺原氨酸T4和T3的正常循環水平，從而發揮重要作用。TSH的產生和分泌一方面受到循環中的T4和T3的負反饋控制，另一方面受到下丘腦促甲狀腺激素釋放激素（TRH）的控制。TSH分子由兩個非相同的亞單位α和β組成，它們以非共價方式結合在一起。在同種物種內，TSH α單位在結構上與相關糖蛋白激素（LH、FSH）的α亞單位相同。相關激素的β亞單位在結構上是激素特異性的，因此決定了它們獨特的生物活性?？刂拼笫蠹谞钕俟δ艿臋C制與人類機制完全類似。這意味著促甲狀腺激素釋放激素刺激垂體腺釋放TSH以及影響垂體腺作用的T4和T3的血清濃度。大鼠和人類甲狀腺生理之間的這種相似性使得大鼠成為評估新藥對甲狀腺代謝狀態影響的非常有用的模型。

艾美捷促甲狀腺激素(大鼠)ELISA(96孔)（ALP-55-TSHRT-E01）檢測原理：

該試劑盒是一種固相酶聯免疫吸附測定（ELISA），采用微孔板格式，設計用于定量測量大鼠血清中的TSH。微孔板涂有特異性針對TSH的單克隆抗體。校準品和樣本被移液到包被有抗體的微孔板中。然后加入多克隆辣根過氧化物酶標記的抗體。在4-8°C下孵育16-24小時期間，由兩種抗體和大鼠TSH組成的三明治復合物形成。通過洗滌步驟去除非反應性組分。向所有孔中添加一種顯色底物TMB（3,3',5,5'-四甲基聯苯胺）。在30分鐘孵育期間，底物被固定酶轉化為有色終產品（藍色）。通過添加鹽酸作為停止溶液（由藍變黃）來停止酶反應。顏色強度與樣本中存在的大鼠TSH濃度成正比。使用微孔板讀取器在450納米處測量顏色溶液的光密度。

一般說明：

1所有試劑和樣本在使用前必須放置至室溫。所有試劑混合時必須避免產生泡沫。

2一旦測試開始，所有步驟都應無中斷地完成。

3為避免交叉污染，每個標準品和樣本使用新的一次性塑料移液管頭。

4吸光度是孵育時間和溫度的函數。開始測定前，建議所有試劑準備就緒，移除蓋子，所有需要的孔固定在支架中等。這將確保每個移液步驟在無中斷的情況下有相等的經過時間。

5作為一般規則，酶促反應與時間和溫度成線性關系。

6應遵循推薦的孵育時間。

7微孔板洗滌很重要。洗滌不當的孔會產生錯誤的結果。建議使用多通道移液管或多步移液管，或自動微孔板洗滌系統。不要在孵育之間讓孔干燥。在沖洗和抽吸過程中不要刮傷包被孔。仔細沖洗和填充所有試劑。在沖洗時，檢查所有孔是否精確填充了洗滌溶液，孔中是否有殘留物。

8建議對校準品、對照品和樣本進行雙重測定，以識別可能的移液錯誤。

9每次運行都必須建立校準曲線。

促甲狀腺激素(大鼠)ELISA(96孔)結果計算：

1. 計算每組校準品、對照品和樣本的平均吸光度值。

2. 通過將每個校準品的平均吸光度與其濃度作圖，構建標準曲線，吸光度值在垂直（Y）軸上，濃度在水平（X）軸上。

3. 使用每個樣本的平均吸光度值，從校準曲線上確定相應的濃度。

4. 自動方法：IFU中的結果已使用4-PL（4參數邏輯）曲線擬合自動計算。4參數邏輯是首選的計算方法。其他數據簡化功能可能會給出略有不同的值。

5. 樣本的濃度可以直接從標準曲線上確定。濃度高于最高校準品的樣本必須進一步稀釋。在計算濃度時，必須考慮這個稀釋因子。

典型校準曲線示例：

以下數據僅供說明之用，不應用來計算另一次運行的結果。

結果的可靠性：

測定必須嚴格按照使用說明進行。此外，用戶必須嚴格遵守良好實驗室規范（GLP）或其他適用的國家標準和/或法律。這對于使用控制試劑尤為重要。在測試程序中始終包含足夠數量的對照品以驗證測定的準確性和精確性是很重要的。只有當所有對照品都在指定范圍內，且所有其他測試參數也都在給定的測定規格內時，測試結果才有效。