ALPCO IgG(大鼠)ELISA, 96孔樣本稀釋&試劑準備方案

IgG檢測試劑盒是一種高靈敏度的雙位點酶聯免疫測定法（ELISA），用于測量大鼠血清和血漿樣本中的IgG。

作為ALPCO在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產品IgG(大鼠)ELISA, 96孔。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

IgG(大鼠)ELISA, 96孔檢測原理：

雙抗體夾心ELISA的原理如圖1所示。在該檢測中，樣品中的IgG與已吸附在聚苯乙烯微量滴定孔表面的抗IgG抗體反應。在通過洗滌去除未結合的蛋白質后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）偶聯的抗IgG抗體。這些酶標記的抗體與先前結合的IgG形成復合物。經過另一輪洗滌后，結合的酶標記抗IgG抗體通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基苯胺（TMB）進行檢測。結合的酶量與所測試樣品中IgG的濃度成正比；因此，在450 nm處的吸光度可以用來測量測試樣品中IgG的濃度。測試樣品中IgG的量可以通過根據標準品構建的標準曲線進行插值得到，并已根據樣品稀釋進行校正。

樣本收集和處理

所有血液成分和生物材料應視為潛在危險物質進行處理。在處理和處置時應遵循普遍安全預防措施。如果血樣凝固、明顯溶血、乳糜，或樣本的完整性存在問題，請做好記錄并謹慎解釋結果。以下列出的樣本收集和存儲條件僅作為一般指南，樣本的穩定性尚未評估。

血清樣本：應通過靜脈穿刺采集血液。血液凝固后，應通過離心分離血清與細胞。去除血清并立即檢測，或分裝并將樣本存儲于-80°C（優選）或-20°C。避免反復凍融。

血漿樣本：應將血液采集到含有抗凝劑的容器中，然后離心。立即檢測或分裝并將樣本存儲于-80°C（優選）或-20°C。避免反復凍融。

已知干擾物質：濃度高于0.1%的疊氮化鈉和硫柳汞會抑制酶反應。

樣本稀釋

該檢測要求每個測試樣本在使用前進行稀釋。每次進行檢測時，所有樣本應重復檢測兩次。推薦的稀釋比例僅為建議，稀釋應基于未知樣本的預期濃度，使稀釋樣本落在標準曲線的動態范圍內。如果不確定樣本值，強烈建議在運行整個板之前，先對一兩個代表性樣本進行系列稀釋檢測。

血清樣本：推薦的起始稀釋比例為1:80,000。要準備1:80,000的樣本稀釋液，將5 ?L的樣本轉移到995 ?L的1X稀釋液中。這將得到1:200的稀釋液。接下來，通過將2 ?L轉移到798 ?L的1X稀釋液中，將1:200的稀釋液進一步稀釋。這將得到最終的1:80,000稀釋液。每個步驟都要充分混合。

血漿樣本：推薦的起始稀釋比例為1:80,000。要準備1:80,000的樣本稀釋液，將5 ?L的樣本轉移到995 ?L的1X稀釋液中。這將得到1:200的稀釋液。接下來，通過將2 ?L轉移到798 ?L的1X稀釋液中，將1:200的稀釋液進一步稀釋。這將得到最終的1:80,000稀釋液。每個步驟都要充分混合。

試劑準備

使用前將所有試劑帶至室溫（16°C至25°C）。

稀釋液濃縮液：所提供的稀釋液為5X濃縮液，必須與蒸餾水或去離子水以1:5的比例稀釋（1份緩沖液濃縮液，4份去離子水）。

洗滌液濃縮液：所提供的洗滌液為濃縮液，必須與蒸餾水或去離子水以1:20的比例稀釋（1份緩沖液濃縮液，19份去離子水）。在低溫儲存時，濃縮液中可能會形成晶體。將濃縮液加熱至30-35°C后再稀釋，可以溶解晶體。

酶-抗體偶聯物：通過將10 ?L酶-抗體偶聯物加入990 ?L的1X稀釋液，計算每個微量滴定板測試條所需的工作偶聯物溶液的量。使用前立即稀釋并避免光照。均勻混合，但要輕柔，避免產生泡沫。

預涂ELISA微孔板：按照提供的方式準備即可使用。打開鋁箔袋，取出板。去除所有不在檢測中的條和孔，將其放回袋中并與干燥劑重新封口。

大鼠IgG標定物：根據批次特定的分析證書準備。

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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