ALPCO IgD ELISA, 96孔：多功能、高通量設計，滿足大規模IgD抗體檢測需求

全人類IgD檢測試劑盒是一種高靈敏度的雙位點酶聯免疫測定法（ELISA）用于測量人血清和血漿樣本中的IgD。僅供研究使用。不是用于診斷程序

作為ALPCO在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產品IgD ELISA, 96孔。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

IgD ELISA, 96孔檢測原理：

雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗（ELISA）的原理如圖1所示。在這個實驗中，樣本中的IgD與已經吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗IgD抗體發生反應。通過洗滌去除未結合的蛋白質后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）結合的抗IgD抗體。這些酶標記的抗體與之前結合的IgD形成復合物。再經過一次洗滌步驟后，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯苯胺（TMB）來檢測免疫吸附劑上結合的酶。結合酶的量與測試樣本中IgD的濃度成正比；因此，450納米處的吸光度是測試樣本中IgD濃度的量度?？梢酝ㄟ^標準曲線插值計算測試樣本中的IgD量，并根據樣本稀釋進行校正。

未提供但必需的材料

精密移液管（2 ?L至1000 ?L）用于制作和分發稀釋液

試管

噴霧瓶或微孔板洗滌/抽吸器

蒸餾水或去離子水

微孔板讀數器

用于準備試劑和緩沖溶液的各種玻璃器皿

計時器

抗凝劑（用于血漿樣本）

離心機

樣本收集和處理

所有血液成分和生物材料應被視為潛在危險。

在處理和處置時遵循通用預防措施。

如果血液樣本出現凝血、嚴重溶血、脂血或樣本完整性受到關注，應做記錄并謹慎解釋結果。

下面列出的樣本收集和儲存條件是作為一般指導方針。

尚未評估樣本的穩定性。

血清樣本：應通過靜脈穿刺收集血液。通過離心分離血清和細胞。移除血清并立即進行檢測或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融循環。

血漿樣本：應將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進行離心。立即進行檢測或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融循環。

已知干擾物質：高于0.1%濃度的疊氮化物和硫柳汞會抑制酶反應。

試劑準備

使用前將所有試劑置于室溫（16°C至25°C）。

稀釋液濃縮液 - 提供的稀釋液是5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水按1:5稀釋（1份緩沖液濃縮液，4份dH2O）。

洗滌液濃縮液 - 提供的洗滌液是20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水按1:20稀釋（1份緩沖液濃縮液，19份dH2O）。當儲存溫度較低時，濃縮液中可能出現結晶。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解結晶。

酶-抗體結合物 - 通過向每個微孔板測試條添加10 ?L酶-抗體結合物至990 ?L的1X稀釋液中，計算每個微孔板測試條所需的工作結合物溶液量。使用前立即稀釋，并避光。均勻混合，但要輕柔。避免起泡。

預涂層ELISA微孔板 - 按提供的狀態使用。揭開箔袋，從袋中取出板。移除在檢測中不會使用的條和孔，放回袋中并重新密封，連同干燥劑。

人IgD校準物 - 根據批次特定的分析證書準備。

檢測程序

所有樣本和標準品應以雙份進行檢測。

標準品和樣本應盡快裝入ELISA孔中，以避免OD讀數變化。使用多通道移液管可以減少這種情況的發生。分別移液100 μL： 0標準（0.0 ng/mL）雙份 1標準（6.25 ng/mL）雙份 2標準（12.50 ng/mL）雙份 3標準（25 ng/mL）雙份 4標準（50 ng/mL）雙份 5標準（100 ng/mL）雙份 6標準（200 ng/mL）雙份 7標準（400 ng/mL）雙份

分別移液100 μL樣本（雙份）至預指定孔中。

在室溫下孵育微孔板六十（60 ± 2）分鐘。孵育期間保持板蓋覆蓋并保持水平。

孵育后，抽吸孔內內容物。

用適當稀釋的洗滌液完全填滿每個孔并抽吸。重復三次，總共四次洗滌。如果手動洗滌：用洗滌緩沖液完全填滿孔，倒置板然后傾倒/搖晃內容物至廢液容器。隨后用吸水紙尖銳擊打孔以去除殘留緩沖液。重復三次，總共四次洗滌。

向每個孔中分別移液100 μL適當稀釋的酶-抗體結合物。在室溫下孵育十（10 ± 2）分鐘。孵育期間保持板蓋覆蓋，避光并保持水平。

如步驟5和6所述洗滌和吸干孔。

向每個孔中分別移液100 μL TMB底物溶液。

在暗處室溫下精確孵育十（10）分鐘。

十分鐘后，向每個孔中加入100 μL終止液。

在三十分鐘內測定每個孔內內容物的吸光度（450 nm）。根據制造商的規格校準板讀數器。

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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