ALPCO 大鼠觸珠蛋白ELISA：優化實驗流程與提高檢測準確性

急性期蛋白是血漿蛋白，它們在感染、炎癥或創傷后濃度增加。第一個被識別的急性期蛋白是在1930年由Tillet和Frances在人類中發現的。血漿蛋白（Hp）是一種異質性血漿蛋白，主要在肝臟中合成。血漿蛋白單體由兩個重鏈（β鏈，40kD）和兩個輕鏈（α鏈，α1為9kD和α2為16kD）組成，它們通過二硫鍵連接。三種主要的血漿蛋白類型是Hp1-1（單體，98kD）、Hp1-2（聚合物，約200kD）和Hp2-2（約400kD）。血漿蛋白水平在急性組織損傷后迅速上升（在24至48小時內），一旦刺激因素被移除，水平就會迅速下降。研究表明，溶血性貧血患者的血漿蛋白水平會降低。血漿蛋白對血紅蛋白（Hb）有很強的親和力，其功能似乎是防止血紅蛋白在尿液中的丟失，這將導致鐵的丟失。

作為ALPCO在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產品大鼠觸珠蛋白ELISA。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

大鼠觸珠蛋白ELISA檢測原理：

雙抗體夾心酶聯免疫吸附測定（ELISA）的原理在圖1中表示。在這種測定中，樣品中的血漿蛋白與已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗血漿蛋白抗體反應。通過洗滌去除未結合的蛋白質后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）結合的抗血漿蛋白抗體。這些酶標記的抗體與之前結合的血漿蛋白形成復合物。經過另一次洗滌步驟后，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯苯胺（TMB），測定免疫吸附劑上結合的酶。結合的酶量與測試樣品中血漿蛋白的濃度直接相關；因此，450納米處的吸光度是測試樣品中血漿蛋白濃度的量度。測試樣品中血漿蛋白的量可以從標準曲線中插值得出，并根據樣品稀釋進行校正。

試劑（足夠96次測定的數量）

稀釋液濃縮液（測定緩沖液） 一瓶含有50毫升5倍濃縮的稀釋測定緩沖液。

洗滌液濃縮液 一瓶含有50毫升20倍濃縮的洗滌液。

酶-抗體結合物100倍 一瓶含有150微升與辣根過氧化物酶結合的親和純化抗大鼠血漿蛋白抗體，在穩定緩沖液中。

顯色底物溶液 一瓶含有12毫升3,3',5,5'-四甲基聯苯胺（TMB）和過氧化氫，在檸檬酸緩沖液中，pH值為3.3。

終止液 一瓶含有12毫升0.3摩爾硫酸。警告：避免與皮膚接觸。

抗大鼠血漿蛋白ELISA微孔板 十二個可移動的八（8）孔微孔條在孔架框架中。每個孔都涂有親和純化的抗大鼠血漿蛋白。

大鼠血漿蛋白校準液 一瓶含有凍干的大鼠血漿蛋白校準液。 僅限研究使用

試劑準備

稀釋液濃縮液

提供的稀釋液是5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，4份dH2O）稀釋1:5。

洗滌液濃縮液

提供的洗滌液是20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，19份dH2O）稀釋1:20。在儲存溫度較低時，濃縮液中結晶形成并不少見。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解晶體。

酶-抗體結合物

通過向每個微孔板測試條中添加10微升酶-抗體結合物到990微升1倍稀釋液中，計算每個微孔板測試條所需的工作結合物溶液量。均勻但輕柔地混合。避免起泡。

顯色底物溶液

按提供狀態使用。

終止液

按提供狀態使用。

抗大鼠血漿蛋白ELISA微孔板

按提供狀態使用。打開微孔板袋，從袋中取出板。取出在測定中不會使用的所有的條和孔，放回袋中并重新密封，連同干燥劑。

大鼠血漿蛋白校準液

請參考分析證書準備大鼠血漿蛋白校準液。

樣本收集和處理

應通過靜脈穿刺收集血液。血凝塊形成后，應通過離心分離血清。對于血漿樣本，應將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進行離心。應小心操作以盡量減少溶血，因為過度溶血可能會影響結果。立即進行測定或分裝樣本并儲存于-20°C。避免反復凍融循環。

1. 預防措施

對于可能含有病原體的任何樣本，必須小心操作以防止與開放性傷口接觸。

2. 添加劑和防腐劑

不需要任何添加劑或防腐劑來保持樣本的完整性。避免使用氮化物污染。

3. 已知干擾物質

氮化物和硫柳汞在濃度高于0.1%時會抑制酶反應。

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

作為ALPCO在中國區域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的ALPCO產品。