ALPCO 骨鈣素（完整）ELISA的生物活性和樣品收集方案

骨鈣素（完整）ELISA是一種用于定量測量的免疫酶測定法血清中完整的人骨鈣素（OST）。僅供研究使用。不用于診斷程序。

作為ALPCO在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產品骨鈣素（完整）ELISA。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

骨鈣素（完整）ELISA檢測原理：

骨鈣素（完整型）酶聯免疫吸附測定（ELISA）是一種在易碎的微孔板（microtiterplates）上進行的固相酶放大靈敏度免疫測定。該測定使用針對人骨鈣素不同表位的單克隆抗體（MAbs）。校準品和樣品與涂覆在微孔板上的捕獲單克隆抗體（MAb 1）以及與辣根過氧化物酶（HRP）標記的單克隆抗體（MAb 2）反應。經過一段時間的孵育，形成夾心結構：涂覆的MAb 1 - 人骨鈣素 - MAb 2 - HRP，然后洗滌微孔板以去除未結合的酶標記抗體。通過顯色反應測量結合的酶標記抗體。添加顯色溶液（TMB即用型）并進行孵育。通過添加終止液來停止反應，然后讀取微孔板在適當波長下的吸光度。通過測量吸光度來比色測定底物轉化量，該吸光度與骨鈣素濃度成正比。

繪制校準曲線，并通過校準曲線插值確定樣品中骨鈣素的濃度。

生物活性：

骨鈣素或骨Gla蛋白（B.G.P）是骨基質的主要非膠原蛋白

分子量為5800Da并且含有49個氨基酸。骨鈣素是由成骨細胞在骨中合成的。之后

在生產過程中，它部分被納入骨基質，其余部分則存在于血液循環中。

骨鈣素的確切生理功能尚不清楚。大量研究表明

骨鈣素的循環水平反映了骨形成的速度。

試劑準備：

1. 校準品：用1.0毫升蒸餾水重懸零校準品和其他校準品。

2. 控制品：用1.0毫升蒸餾水重懸控制品。

3. 工作用抗骨鈣素-HRP結合物：通過向2毫升結合物緩沖液中加入40微升濃縮的抗骨鈣素-HRP結合物來準備足夠的結合物溶液。使用漩渦混合器混合均勻。使用前立即準備。

4. 工作洗滌液：通過向1體積的洗滌液（200倍）中加入199體積的蒸餾水來準備足夠的1倍工作洗滌液。使用磁力攪拌器混合均勻。當天結束時丟棄未使用的1倍工作洗滌液。

試劑的儲存和有效期：

? 在開封或重懸之前，如果儲存在2-8°C的環境中，所有試劑組分在瓶簽上標明的有效期前都是穩定的。

? 未使用的孔必須儲存在2-8°C的環境中，并放在含有干燥劑的密封袋中，直到有效期。

? 重懸后，校準品和控制品非常不穩定，重懸后立即使用。對于更長時間的儲存，應分裝并在-20°C下保存，最長不超過6周。使用后立即冷凍，不要等到所有樣品都移液后再冷凍。避免后續的凍融循環。

? 濃縮洗滌液在常溫下直到有效期前都是穩定的。

? 新鮮配制的1倍工作洗滌液應在當天內使用。

? 第一次使用后，如果儲存在原始密閉瓶中2-8°C的環境中，濃縮結合物在有效期前是穩定的。

? 如果試劑組分的物理外觀發生變化，可能表明不穩定或變質。

樣品收集和準備：

? 通過靜脈采血，注意避免溶血；樣品必須保存在冰浴中。在3小時內將血清與細胞分離，推薦使用冷藏離心機。離心后立即向血清中加入100微升的Trasylol?（10000 IU/mL）（以獲得每毫升樣品1000 IU Trasylol?）。

? 經過這種處理后，樣品在2-8°C下穩定3天。如果需要更長時間的延遲，樣品必須冷凍（-20°C），但樣品只能解凍一次！對于重復測試，應分裝冷凍樣品，并在第一次解凍后丟棄每個樣品。

? 不要使用溶血或脂血的樣品。

文獻參考：

1. J.P. BROWN, P.D. DELMAS and al. (May 19, 1984)."Serum BGP: a specific marker for bone formation in postmenopausal osteoporosis". The Lancet, 1091-1093.

2. P.A. PRICE. (1985). "Vitamin K-dependent formation of osteocalcin and its function".Vitamins and hormones, 42,65-108.

3. R.E. COLEMAN, G. MASHITER and al. (1988). "Osteocalcin: a potential marker of metastatic bone disease and response to treatment".Eur. J. Cancer Clin. Oncol., 24,1211-1217.

4. S. MINISOLA and al. (1988). "Serum osteocalcin in primary hyperparathyroidism: shortterm effect of surgery". Mineral Electrolyte Metab., 14,201-207.

5. L.A. COULTON, C.J. PRESTON and al. (1988). "An evaluation of serum osteocalcin in Paget's disease of bone and its response to diphosphonate treatment". Arthritis and Rheumatism, 31,9,1142-1147. 

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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