AF 555偶聯試劑盒數據分析&FAQ

FlyLink? 染料是一系列高度水溶性的熒光染料，跨越可見光和近紅外光譜，用于標記生物分子，特別是蛋白質和核酸。FlyLink? 染料具有不同熒光染料的核心結構，覆蓋了從UV到NIR的熒光光譜。對核心結構的創新修改使FlyLink? 染料優于其他商業染料，具有許多創新的新特性。我們的試劑盒已經預先激活，可以直接用于偶聯。FlyLink? 標簽套件是為準備FlyLink而設計的?直接來自蛋白質、肽和其他含有游離氨基的配體的綴合物

艾美捷AF 555偶聯試劑盒：

Cat #: D-AKE520/D-AKE530/D-AKE540/D-AKE560/D-AKE580

Size: 100 μg*3

Storage: Stored at -20°C for 6 months, protected from light

AF 555偶聯試劑盒信息：

圖1：FlyLink? 555是一種明亮且可光穩定的熒光染料，可由555 nmargonlaserline zui佳激發，它是TRITC、Cy3和Alexa Fluor 555的超級替代品。它產生生物學上更特異的偶聯物和無背景

圖2：FlyLink? 555光譜圖

數據分析

1.共軛物濃度的計算：

C（mg/mL）=｛[A2so-（AmaxxCf）]÷1.4｝x稀釋因子

式中：C，實驗中收集的偶聯物的濃度；稀釋因子：光度測量中的稀釋因子；

Azso和Ama：280 nm處的吸光度和zui大吸收波長處的吸光度（最大

FlyLink“”AF 488的吸收波長為490 nm）；Cf：修正系數。FlyLink“”AF 488的Cf值為0.1；

1.4：gG的消光系數（mL/mg）。FlyLink“”AF 488的消光系數為70000。

2.共軛物標記度（DOL）的計算：

DOL=（AmaxMwtx稀釋系數）÷（exC）

式中：Ama：在zui大吸收波長（FlyLink“AF 488的zui大吸收波長為490 nm）下的吸光度；Dilution factor：光度測量中的稀釋因子；C：實驗中收集的偶聯物的濃度；Mwt：待標記樣品的分子量；?：熒光染料的消光系數，FlyLink的消光系數”“488 AF是70000。

注：柱洗脫的綴合物可能過于濃縮，無法直接進行吸光度檢測，因此需要稀釋至合適的濃度（在蛋白質分析儀檢測的濃度范圍內）。稀釋倍數（即稀釋因子）需要根據初始樣品質量和洗脫綴合物的總體積進行估計。如果未稀釋，則稀釋系數為1。

FAQ：

Q1：濃縮后，樣品濃度仍低于2 mg/mL？

A1：如果濃縮后樣品濃度仍低于2 mg/mL，則可以適當調整標記系統的體積，但zui終濃度應大于1 mg/mL。FlyLink的音量?步驟1中的AF488標記溶液應為標記系統體積的10%。在步驟2中，去離子水可能不會結塊，并且激活的FlyLink的體積? 488解決方案保持不變。你也可以根據自己的實驗做出適當的調整。

Q2：如何選擇合適的純化柱，以適應不同分子量的待標記樣品

A2：純化的柱適用于分子量為100KD至200KD的樣品。如果樣品的分子量大于200kD或小于100kD，則zui好配備更合適的純化柱尺寸。

Q3：待標記樣品的分子量是否與FlyLink相似? AF 488？

A3：如果樣品的分子量與FlyLink相似? AF 488，在完成與本說明書對應的標記步驟后，加入30?L 0.5?M NH4Cl，并在37°C下孵育10分鐘，以猝滅freeFlyLink?AF 488，而不需要純化步驟。

Biogradetech全球生命科學和醫藥研發行業關鍵原料與試劑的領先供應商：Biogradetech成立于2015年，總部位于美國加利福尼亞州，早期以產品技術研發服務起家，逐步發展了廣泛的產品線，并將其商業化銷售，包括蛋白質、抗體、酶、培養基、試劑盒和儀器。適用于細胞生物學、蛋白質組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經科學、血液分析和高通量藥物篩選等領域。