創新光譜+交叉吸附：Jackson AF 555/568 標記二抗，照亮多靶點免疫熒光高分辨成像之路

Jackson ImmunoResearch推出的Alexa Fluor 555和568標記二抗，通過創新的光譜設計與嚴格交叉吸附工藝，徹底革新了多靶點免疫熒光實驗的可行性。這兩款染料填補了傳統橙色通道（550-600 nm）的空白，與DAPI（核染色）、Alexa Fluor 488（綠色）、647（遠紅外）形成 “黃金四色組合” ，實現了細胞亞結構的高分辨率同步成像。

在生命科學和醫學研究中，熒光標記技術一直是不可或缺的工具。無論是細胞成像、蛋白質相互作用研究，還是流式細胞術，熒光染料的性能直接決定了實驗的成敗。今天，我們要為大家介紹兩款備受矚目的熒光染料——AF 555和AF 568，它們來自全球知名的抗體和熒光染料供應商Jackson ImmunoResearch。

什么是AF 555和AF 568？

AF 555和AF 568是兩種高性能的熒光染料，屬于Alexa Fluor系列。它們以其卓越的光穩定性、高量子產率和優異的熒光強度而聞名。這些特性使得它們在多重熒光標記實驗中表現出色，尤其是在需要高分辨率和低背景噪聲的應用中。

- AF 555：激發波長約為555 nm，發射波長約為565 nm，適合綠色到橙色的熒光通道。

- AF 568：激發波長約為568 nm，發射波長約為580 nm，適合橙色到紅色的熒光通道。

這兩種染料可以與抗體、蛋白質、核酸等生物分子共價結合，廣泛應用于免疫熒光、流式細胞術、超分辨率顯微鏡等領域。

為什么選擇AF 555和AF 568？

1. 卓越的光穩定性  

在長時間成像實驗中，光漂白是一個常見問題。AF 555和AF 568具有優異的光穩定性，能夠在高強度激光照射下保持熒光信號，確保實驗結果的可靠性。

2. 高量子產率  

量子產率是衡量熒光染料效率的重要指標。AF 555和AF 568的高量子產率意味著它們能夠將更多的激發光轉化為熒光信號，從而提高檢測靈敏度。

3. 寬光譜范圍  

這兩種染料的激發和發射光譜范圍較寬，能夠與多種激光器和濾光片兼容，非常適合多重熒光標記實驗。

4. 低背景噪聲  

AF 555和AF 568的熒光信號與背景噪聲比（信噪比）極高，這使得它們在低表達目標檢測中表現出色。

 應用場景

1. 免疫熒光染色  

在免疫熒光實驗中，AF 555和AF 568可以與一抗或二抗結合，用于標記細胞或組織中的特定抗原。它們的高亮度和光穩定性使得成像結果更加清晰。

2. 流式細胞術  

在流式細胞術中，AF 555和AF 568可以用于標記細胞表面或內部的分子，幫助研究人員分析細胞群體的異質性。

3. 超分辨率顯微鏡  

超分辨率顯微鏡技術（如STED、PALM/STORM）需要高亮度和光穩定性的熒光染料。AF 555和AF 568是這些技術的理想選擇。

4. 多重標記實驗  

由于AF 555和AF 568的光譜特性與其他Alexa Fluor染料（如AF 488、AF 647）兼容，它們可以用于多重標記實驗，同時檢測多個目標分子。

核心優勢：

1. 光譜無干擾：AF555（Ex552/Em572）與AF568（Ex577/Em602）的激發/發射峰間距優化至25-30 nm，顯著降低通道間串擾。

2. 交叉吸附工藝：所有二抗經過驢/山羊宿主來源的嚴格吸附處理，消除與常見物種（如小鼠、兔、大鼠）抗體的非特異性結合。

3. 光穩定性提升：對比傳統Cy染料（如Cy3/Cy5），Alexa Fluor系列光漂白抗性提高3-5倍，適合長時間活細胞成

Alexa Fluor染料的光譜特性：

實際應用案例與性能驗證

人上皮細胞（HEp-2）四色成像

· 靶標組合：DAPI（核）、AF488-Ki67（增殖）、AF555-α微管蛋白（細胞骨架）、AF647-GM130（高爾基體）。

· 結果：

o 分辨率提升40%：細胞器邊界清晰度顯著優于傳統TRITC染料（圖2）。

o 信噪比提升25-30%：AF555/568的量子產率（Φ=0.69）高于同類染料，適合低豐度蛋白檢測。

可與DAPI結合用于四色免疫熒光的有用染料組合是Alexa Fluor 488、568和647。圖中展示了這種顏色組合在人類上皮細胞（HEp-2）中的應用，這些細胞被染色以顯示常見的細胞蛋白標記物。Ki-67蛋白（細胞增殖的標志物）以綠色顯示。細胞骨架結構的某些部分以黃色顯示，這是通過使用抗α-微管蛋白抗體染色微管來檢測異二聚體纖維的結果。細胞間接觸通過染色上皮細胞標志物E-鈣黏蛋白來可視化，它以紅色顯示，與黃色的微管并列。細胞核用DAPI染色，以藍色顯示。

三種Alexa Fluor染料的光譜特性與DAPI核染色結合，實現有效的四色免疫熒光。通過染色人類上皮（HEp-2）細胞中的常見細胞蛋白標記物，展示了這種顏色組合。Ki-67蛋白是細胞增殖的標記物，在綠色中可見。細胞骨架結構的某些方面在黃色中可見，通過使用抗α微管蛋白染色微管來檢測異二聚體纖維。參與高爾基體堆疊和結構維持的高爾基體基質蛋白，使用抗人GM130/GOLGA2染色，在細胞核邊緣呈紅色可見。細胞核使用DAPI染色，呈藍色。

產品選擇

1. 核心產品列表（部分）

注：完整列表涵蓋20+種宿主與抗體類型，支持IgG/IgM/IgA等亞型。

與傳統技術的對比優勢

溫馨小貼士Tips：

1. 優化抗體標記比例  

為了獲得最佳的熒光信號，建議優化抗體與染料的標記比例。通常，每個抗體分子標記3-6個染料分子效果最佳。

2. 選擇合適的濾光片  

確保顯微鏡或流式細胞儀的濾光片與AF 555和AF 568的激發和發射光譜匹配，以獲得最強的熒光信號。

3. 避免長時間光照  

盡管AF 555和AF 568具有優異的光穩定性，但仍建議盡量減少樣品在強光下的暴露時間，以延長熒光信號的壽命。

Jackson ImmunoResearch是全球領先的抗體和熒光染料供應商，專注于為生命科學研究提供高質量的產品和技術支持。其產品線涵蓋二抗、熒光染料、標記試劑盒等，廣泛應用于免疫學、細胞生物學、分子生物學等領域。