Assay Genie 小鼠hs-CRP(高敏C反應蛋白)ELISA試劑盒的檢測原理和操作步驟

hs-CRP是一種重要的炎癥標志物，廣泛應用于小鼠炎癥反應的研究。該試劑盒可用于檢測小鼠血清、血漿及其他生物樣本中的hs-CRP濃度。通過監測hs-CRP水平，可以評估炎癥反應的強度和進展，為炎癥相關疾病的研究提供重要依據。

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檢測原理

小鼠高敏C反應蛋白（hs-CRP）ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法進行檢測。具體步驟如下：

1. 包被抗體：將特異性抗小鼠hs-CRP抗體預先包被在酶標板上。

2. 樣本結合：將標準品或樣本加入酶標板孔中，樣本中的hs-CRP會與包被抗體結合。

3. 檢測抗體：加入生物素標記的抗小鼠hs-CRP抗體，該抗體與樣本中的hs-CRP結合。

4. 酶結合物：加入鏈霉親和素-辣根過氧化物酶（HRP）結合物，與生物素標記的抗體結合，形成夾心復合物。

5. 顯色反應：加入TMB底物，與HRP反應產生藍色產物，加入終止液后顏色變為黃色。

6. 結果測定：在450 nm波長處測量吸光度（OD值），樣本中的hs-CRP濃度與OD值成正比。

操作步驟

1. 試劑準備：

- 將所有試劑回溫至室溫（18-25°C）。

- 配制洗液、標準工作液、生物素化檢測抗體工作液和HRP結合物工作液。

2. 加樣：

- 將標準品或樣本加入酶標板孔中，每孔100μL。

- 37°C孵育90分鐘。

3. 加生物素化檢測抗體：

- 棄去孔內液體，加入100μL生物素化檢測抗體工作液。

- 37°C孵育1小時。

4. 洗滌：

- 棄去孔內溶液，加入350μL洗液，浸泡1分鐘，棄去溶液并拍干。

- 重復洗滌3次。

5. 加HRP結合物：

- 加入100μL HRP結合物工作液。

- 37°C孵育30分鐘。

6. 再次洗滌：

- 重復步驟4的洗滌過程5次。

7. 加底物試劑：

- 加入90μL底物試劑。

- 37°C孵育約15分鐘，避光。

8. 加終止液：

- 加入50μL終止液。

9. 讀數：

- 立即用450 nm波長的微孔板讀數儀測定吸光度。

注意事項

1. 樣本處理：所有樣本在測試前需進行預處理，確保樣本中無雜質。

2. 試劑保存：未使用的試劑應按要求保存，避免反復凍融。

3. 操作連續性：一旦開始實驗，應盡量連續完成所有步驟。

4. 重復性檢測：建議所有樣本和標準品雙份檢測，以確保結果的可靠性。

小鼠高敏C反應蛋白（hs-CRP）ELISA試劑盒憑借其高靈敏度和特異性，已成為研究小鼠炎癥反應的重要工具。通過嚴格的操作和準確的檢測，該試劑盒可為相關研究提供可靠的數據支持。

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