Cell Biolabs pLenti-AAVR-Puro 載體：高效的慢病毒表達系統，助力基因研究

腺相關病毒（AAV）源自有缺陷的細小病毒，依賴其他病毒（如腺病毒和皰疹病毒）提供的必要輔助功能以實現高效的病毒復制和傳播。AAV與任何已知疾病均無病因學關聯，并已成功用于在多種組織中建立高效且長期的體內基因表達，且未引起顯著的細胞免疫反應或毒性。AAV具有單鏈DNA基因組，長度約為4.7 kb。所有已鑒定的AAV血清型均具有三個關鍵特征，包括兩份AAV末端重復序列（ITR）、一個rep區和一個cap區。

最近，通過全基因組篩選尋找AAV轉導所必需的基因，發現I型跨膜蛋白KIAA0319L（現更名為AAV受體，AAVR）是多種AAV血清型進入代表性細胞類型以及在小鼠體內的關鍵受體（參考文獻4）。AAVR具有一個跨膜區和一個短的C末端細胞質結構域，后者對于向反式高爾基網絡的逆向運輸是必需的。其外域（與AAV衣殼結合）包含五個串聯的Ig樣多囊腎?。≒KD）結構域、一個MANEC結構域和一個N末端信號肽。

作為Cell Biolabs全國總代理，艾美捷科技強烈推薦Cell Biolabs熱銷產品pLenti-AAVR-Puro 載體。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

pLenti-AAVR-Puro 載體：

慢病毒生產

轉染前一天：將足夠數量的293T細胞或293LTV細胞（產品編號 LTV-100）鋪板，使其在轉染當天達到70-80%的匯合度。

轉染細胞：使用磷酸鈣或其他轉染試劑進行轉染。

注意：建議使用FuGENE?轉染試劑（Roche Applied Science）或Lipofectamine? Plus（Invitrogen）進行轉染。推薦質粒比例為3:1:1:1（pLenti-AAVR-Puro：pCMV-VSV-G：pRSV-REV：pCgpV）。

收集慢病毒上清：轉染后36-72小時收集慢病毒上清?？稍?2小時間隔內收集2次或3次。收集期間需保存于4°C。

處理上清：將收集的上清合并，以1500 rpm離心5分鐘去除細胞碎片，并通過0.22 ?m濾膜過濾。

保存上清：上清可直接使用，或根據需要進行純化/濃縮。長期保存時，需將上清分裝后保存于-80°C。

包裝后注意事項

包裝慢病毒只是確?；虺晒Ρ磉_的第一步。在感染宿主細胞之前，需要考慮以下步驟：

慢病毒的濃縮與純化：由于慢病毒的潛伏特性，在感染宿主細胞之前，必須確保病毒高度濃縮。此外，病毒上清中的雜質可能會降低感染效率。

測定慢病毒滴度：這是確保病毒能夠一致轉導到宿主細胞的重要步驟。然而，qPCR或穩定克隆計數可能需要1-2周時間。傳統的p24 ELISA試劑盒可能會大幅高估慢病毒滴度。我們的先進p24 ELISA試劑盒QuickTiter?慢病毒滴度試劑盒（產品編號 VPK-107）采用獨家技術，可去除上清中的游離p24，從而提供更準確的慢病毒滴度。結果可在6-18小時內獲得。

使用轉導試劑提高感染效率：許多細胞難以被慢病毒有效感染，而缺乏輔助試劑時，轉導效率可能會很低。雖然Polybrene?等試劑可以提供幫助，但往往仍不足夠。Cell Biolabs的ViraDuctin?慢病毒轉導試劑盒（產品編號 LTV-200）中的專有試劑可與病毒形成超復合物，通過促進病毒與細胞的相互作用，顯著提高轉導效率。

文獻參考：

1. Auricchio, A., Hildinger, M., O'Connor, E., Gao, G. P. and Wilson, J. M. (2001) Hum Gene Ther 12:71–6.

2. Brument, N., Morenweiser, R., Blouin, V., Toublanc, E., Raimbaud, I. et al. (2002) Mol Ther 6:678–86.

3. Clark, K., Liu, X., McGrath, J., and Johnson, P. (1999) Hum. Gene Ther., 10, 1031-1039.

4. Pillay S., Meyer N.L., Puschnik A.S., Davulcu O., Diep J., Ishikawa Y., Jae L.T., Wosen J.E.,Nagamine C.M., Chapman M.S., et al. (2016) Nature. 530, 108–112.

5. Dudek A.M., Pillay S., Puschnik A.S., Nagamine C.M., Cheng F., Qiu J., Carette J.E.,Vandenberghe L.H. (2018) J. Virol. 92, 2213-17.

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7. Pillay S., Zou W., Cheng F., Puschnik A.S., Meyer N.L., Ganaie S.S., Deng X., Wosen J.E.,Davulcu O., Yan Z., et al. (2017) J. Virol. 91, 391-17.

Cell Biolabs公司位于美國加利福尼亞州南部重要的工業城市圣迭戈（San Diego），是有名的細胞學試劑品牌，作為前沿的細胞學分析檢測試劑盒生產商，為生物技術和研究類客戶提供好的基于細胞功能研究以及疾病等方面的高端產品和技術服務。產品主要涵蓋細胞研究、細胞信號通路和蛋白質生物學、代謝研究、病原體和毒素、干細胞研究等領域。全球眾多大學、政府研究機構、生物、制藥企業的科研實驗室均在使用Cell Biolabs的產品。