抗RNA聚合酶II磷酸化多克隆抗體，可直接用于臨床樣本及動物模型研究

一、產品概述

由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的抗RNA聚合酶II磷酸化（Ser2）多克隆抗體（貨號：A300-654A）為兔源抗人/小鼠RNA聚合酶II亞基A（POLR2A）C端重復結構域中絲氨酸2磷酸化（Phospho S2）的特異性多克隆抗體。RNA聚合酶II是催化DNA轉錄為RNA的核心酶復合物，其最大亞基RPB1的C端由高度保守的七肽重復序列（YSPTSPS）串聯而成，該區域中Ser2的磷酸化狀態與轉錄延伸、RNA加工及轉錄偶聯修復等關鍵生物學過程密切相關。本抗體經抗原親和純化，適用于免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）及免疫印跡（WB）等多種應用，是研究轉錄調控機制的可靠工具。

二、詳細規格

參數 | 規格

靶標 | RNA聚合酶II磷酸化（S2）

反應種屬 | 小鼠、人

應用 | IHC、IP、WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 圍繞絲氨酸2位點的磷酸化合成肽（對應人POLR2A C端重復序列）

抗體類型 | IgG

偶聯物 | 未偶聯

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 200 ug/ml

儲存溫度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖液 | Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09% 疊氮鈉

三、產品制備與質量控制

本抗體采用固相載體固定的磷酸化RNA聚合酶II（S2）特異性表位進行親和純化。免疫原為磷酸化合成肽段，其序列對應人RNA聚合酶II（GeneID 5430）C端重復序列（YSPTSPS）中絲氨酸2位點周圍的區域。免疫球蛋白濃度通過比爾定律測定，以1 mg/ml IgG在280 nm處吸光度為1.4為基準。

質量保證：每批次抗體均經過嚴格的功能驗證，包括：

Western blot檢測人及小鼠細胞裂解液中磷酸化Pol II S2的特異性條帶（預測分子量約220 kDa）；

免疫沉淀結合質譜或Western blot驗證靶標捕獲效率；

免疫組化對福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片的染色效價評估。

四、推薦應用與實驗條件

所有Western blot實驗建議使用5%脫脂牛奶-TBST作為封閉液和抗體稀釋液，一抗孵育條件為4°C過夜。

應用 | 推薦稀釋度 / 用量 | 備注

Western Blot (WB) | 1:2000 – 1:10000 | 推薦使用3-8% Tris-醋酸凝膠分離。檢測細胞裂解液時，二抗推薦山羊抗兔IgG（H+L）（貨號A120-101P）；檢測免疫沉淀物時，二抗建議使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，并在封閉液中加入5%正常豬血清（貨號S100-020）以降低重鏈干擾。

Immunoprecipitation (IP) | 6 ug/mg 裂解物 | 每毫克總蛋白使用6 ug抗體。建議與Protein A/G瓊脂糖珠或磁珠配合使用。

Immunohistochemistry (IHC) | 1:200 – 1:1000 | 對FFPE組織切片，推薦使用pH 6.0的枸櫞酸鹽緩沖液進行熱誘導抗原修復。

五、儲存與穩定性

儲存條件：2 - 8°C，切勿冷凍。反復凍融會破壞抗體活性。  

有效期：自收貨之日起1年，在指定條件下保存可維持完整效價。  

運輸條件：冰袋冷藏運輸，收貨后請立即存放于2-8°C。  

防腐劑：緩沖液含0.09%疊氮鈉，可抑制微生物生長。注意：疊氮鈉會干擾某些酶偶聯檢測（如HRP），若需去除，可通過透析或脫鹽柱處理。

六、注意事項

1. 研究用途限制：本產品僅限科研使用，不得用于臨床診斷或治療。

2. 安全操作：疊氮鈉為有毒化合物，操作時請佩戴手套及護目鏡。疊氮鈉在金屬管道中可能形成爆炸性疊氮化物，廢液處理時請用大量水稀釋。

3. 特異性驗證：建議在使用新批次抗體時，同時設置磷酸酶處理對照（如λ磷酸酶）或使用非磷酸化肽段競爭實驗，以確認信號的特異性。

4. 應用優化：對于不同的樣本類型（如組織、細胞系）及實驗體系，可能需要進一步滴定最佳抗體稀釋度。

七、典型實驗結果預期

Western Blot：在人HEK293、HeLa或小鼠NIH/3T3細胞裂解液中，可檢測到一條約220 kDa的條帶；用RNA聚合酶II抑制劑（如DRB或Flavopiridol）處理細胞后，該條帶信號顯著減弱。

Immunoprecipitation：6 ug/mg裂解物的用量可有效富集磷酸化Pol II，洗脫產物適用于下游Western blot或質譜鑒定。

IHC：在人扁桃體、睪丸或小鼠腦組織FFPE切片中，可見細胞核特異性著色，尤其在活躍轉錄區域（如生發中心、神經元核）呈現強陽性。

八、相關產品推薦

二抗 | A120-101P | 山羊抗兔IgG（H+L）HRP偶聯物

阻斷血清 | S100-020 | 正常豬血清，用于IP-Western輕鏈特異性檢測

陽性對照裂解物 | 可單獨咨詢 | 經PMA或UV處理的人細胞裂解物