兔抗PELP1/MNAR抗體親和純化，經濟適用于大規模篩選

PELP1（脯氨酸、谷氨酸和亮氨酸豐富蛋白1，也稱MNAR）是一種多功能支架蛋白，參與核受體信號轉導、非基因組激素作用以及腫瘤發生等多種生物學過程。針對這一靶點的特異性抗體是研究其功能機制的關鍵工具。本文詳細介紹一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗PELP1/MNAR親和純化多克隆抗體（貨號：A300-180A）的技術規格、生產工藝、應用條件及性能特點，為研究人員提供實用的操作參考。

一、產品基本規格

該抗體為兔多克隆抗體，靶向人PELP1/MNAR蛋白，同時與小鼠PELP1具有反應性?？贵w形式為完整IgG，未偶聯標記物，亞型為IgG。經抗原親和純化后，濃度達1000 ug/ml（1 mg/ml），保存于Tris-檸檬酸鹽-磷酸鹽緩沖液（pH 7–8）中，含0.09%疊氮鈉作為防腐劑。儲存條件為2–8°C，自收貨之日起有效期為一年。注意：因含疊氮鈉，不可直接用于活細胞實驗或體內注射；使用前可通過透析或超濾去除疊氮鈉。

二、免疫原與表位信息

抗體采用特異性表位親和純化工藝。免疫原對應人PELP1/MNAR蛋白第1000至1050位氨基酸之間的區域（參考序列號：AAN41255.1，GeneID 27043）。該區域位于蛋白C端附近，具有較好的抗原特異性。親和純化時，將上述表位肽段固定于固相載體，從抗血清中捕獲特異性IgG，從而確保抗體識別天然或變性的PELP1蛋白。免疫球蛋白濃度依據比爾定律測定（1 mg/ml IgG在280 nm處吸光度為1.4）。

三、推薦的實驗應用與稀釋條件

以下應用及稀釋度均經過驗證或提供明確起始范圍。所有Western blot實驗均使用5%脫脂牛奶-TBST作為封閉液和抗體稀釋液，一抗孵育過夜。

1. 蛋白質印跡（Western Blot）

推薦稀釋度：1:2,000 – 1:10,000

細胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）二抗（貨號A120-101P）

免疫沉淀物WB：需使用抗兔IgG輕鏈HRP標記二抗，并在封閉緩沖液中加入5%正常豬血清（貨號S100-020）。這一設計可避免檢測時出現重鏈的干擾條帶，尤其適用于IP后WB分析。

2. 免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋度：1:1,000 – 1:5,000

抗原修復：對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用pH 6.0的檸檬酸緩沖液進行熱誘導抗原修復。建議根據組織類型優化修復時間（通常95–100°C維持15–20分鐘）。

3. 免疫沉淀（IP）

-推薦用量：每毫克細胞裂解液使用6 ug抗體?？梢罁繕说鞍棕S度適當調整，建議預先通過Western blot驗證IP效率。

四、靶點生物學背景

PELP1（也稱MNAR）最初被鑒定為一種與Src家族激酶（如Lck、c-Src）SH2結構域相互作用的蛋白。后續研究發現，它是一個廣泛作用的共調節因子，可與多種核受體（如雌激素受體ERα、雄激素受體、糖皮質激素受體）及轉錄因子相互作用。PELP1參與非基因組信號通路：與ERα、Src激酶、PI3K、SHC及G蛋白形成稱為“信號體”（signalsome）的多蛋白復合物，介導快速的胞內信號轉導。

作為轉錄共調節因子和信號蛋白，PELP1在細胞增殖、凋亡、分化、腫瘤發生及轉移中發揮重要功能。其在乳腺癌、前列腺癌等多種腫瘤中異常表達，并與內分泌治療抵抗相關。因此，該抗體適用于癌癥生物學、核受體信號轉導、表觀遺傳調控及藥物篩選等領域的研究。

五、產品性能特點

1.高親和力純化：使用表位特異性親和層析，非特異性背景低。經Western blot驗證，在人及小鼠細胞裂解液中可檢測到預期分子量約150–160 kDa的條帶（PELP1分子量因磷酸化及剪接變異存在差異）。

2.寬應用范圍：同時適用于WB、IHC和IP，滿足蛋白表達分析、組織定位及相互作用研究需求。

3.高稀釋比：WB稀釋度高達1:10,000，IHC達1:5,000，抗體用量經濟。

4.明確表位區域：精確到第1000–1050位氨基酸，便于用戶結合自身突變體或截短體實驗進行結果解讀。

5.交叉反應性：經測試與小鼠PELP1反應，適用于鼠源樣本。與其他物種的潛在交叉反應需用戶自行驗證。

六、實驗操作注意事項

1. 樣品制備

裂解緩沖液建議使用含蛋白酶抑制劑（如PMSF、cocktail）的RIPA或NP-40裂解液。

對于IP實驗，裂解液中鹽濃度不宜過高（推薦150 mM NaCl），以免破壞蛋白復合物。

2. 抗體稀釋液

WB及IHC一抗稀釋可使用含5%脫脂牛奶或3% BSA的TBST。疊氮鈉會抑制HRP活性，若二抗為HRP標記，務必確保一抗稀釋液中不含疊氮鈉（本抗體原液含疊氮鈉，稀釋后濃度極低影響可忽略，但高靈敏度檢測建議使用不含疊氮鈉的稀釋液）。

3. 免疫沉淀流程

每mg裂解液加入6 ug抗體，4°C旋轉孵育2小時或過夜。

推薦使用蛋白A或蛋白G瓊脂糖珠（兔IgG結合良好）。洗滌步驟使用裂解緩沖液洗滌3–5次，每次5分鐘。

4. IHC關鍵步驟

脫蠟與水化后，務必進行抗原修復。檸檬酸緩沖液（pH 6.0）微波或高壓修復均可。

內源性過氧化物酶阻斷（3% H2O2處理10–15分鐘）適用于非熒光檢測。疊氮鈉不影響IHC顯色系統。

七、儲存與穩定性

原液于2–8°C避光保存，切勿冷凍。冷凍會導致蛋白聚集及活性下降。在推薦緩沖液（含疊氮鈉）中，抗體至少穩定一年。若需長期儲存（超過一年），建議分裝后冷凍于-20°C或-80°C，但需注意反復凍融不宜超過2–3次。疊氮鈉在冷凍條件下仍可抑菌，但分裝可減少污染風險。