兔抗Rad21抗體親和純化：高純度低背景，實驗重復性強

一、產品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品為兔源抗Rad21多克隆抗體（貨號：A300-080A），經抗原親和純化制備，以未標記的完整IgG形式提供。該抗體特異性識別人類和鼠源的Rad21蛋白（亦稱SCC1，黏連蛋白復合物亞基），適用于免疫沉淀（IP）和蛋白質印跡（WB）應用，是研究有絲分裂、減數分裂染色體分離及DNA損傷修復的關鍵工具。

二、核心產品參數

參數項目 | 具體規格

靶標蛋白 | Rad21

反應種屬 | 小鼠、人

宿主來源 | 兔

克隆類型 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原區域 | 第581位至C末端

抗體亞型 | IgG

標記類型 | 未標記

純化方式 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

工作濃度 | 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

保存溫度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖體系 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉

三、推薦應用與實驗條件

3.1 應用稀釋度匯總

應用技術 | 推薦用量/稀釋度 | 備注

免疫沉淀（IP） | 6 ?g / mg 裂解物 | 每毫克總蛋白使用6微克抗體

蛋白質印跡（WB） | 1:10,000 - 1:25,000 | 寬稀釋范圍，高靈敏度，建議從1:10,000起始

3.2 蛋白質印跡（WB）專用實驗條件

通用條件：

封閉液及抗體稀釋液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育方式：過夜孵育（不可縮短）

細胞裂解物Western Blot：

推薦二抗：山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）

免疫沉淀產物的Western Blot：

推薦二抗：抗兔IgG輕鏈HRP標記抗體

封閉液補充：需添加5%正常豬血清（貨號S100-020）

*重要提示：使用輕鏈特異性二抗可避免免疫沉淀實驗中抗體重鏈（約55 kDa）的交叉檢測干擾，Rad21分子量約為75 kDa，重鏈信號不直接影響目標位置，但仍建議遵循此標準以獲得最佳信噪比。

四、免疫原與表位信息

4.1 免疫原區域

本抗體免疫原對應人Rad21蛋白第581位至C末端之間的區域。依據NP_006256.1（GeneID 5885）的編號體系，人Rad21全長631個氨基酸，因此表位映射在581–631位氨基酸之間（即C末端區域）。

4.2 表位位置

抗體識別的特異性表位位于C末端區域。Rad21蛋白是一種“kleisin”家族成員，其C末端參與與SMC1/SMC3 ATPase結構域的相互作用，對于黏連蛋白環的結構完整性和功能至關重要。該區域也是caspase蛋白酶切割的位點所在（在凋亡信號通路中發生特異性切割）。

五、儲存與穩定性

推薦儲存條件：2°C至8°C冷藏，切勿冷凍（冷凍會導致蛋白變性及抗體活性喪失）

有效期：自收貨之日起1年

緩沖液成分：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑

pH范圍：7–8的寬泛pH范圍提供了良好的緩沖穩定性

運輸建議：冷藏運輸，避免反復溫度波動

六、主要生物學功能：

1. 姐妹染色單體黏連：在有絲分裂和減數分裂過程中，黏連蛋白復合物環繞姐妹染色單體，將其從DNA復制后到分裂后期前維持在一起，確保正確的染色體分離。

2. DNA雙鏈斷裂修復：Rad21通過同源重組途徑參與DNA雙鏈斷裂的修復。在DNA損傷時，黏連蛋白被募集到斷裂位點，將姐妹染色單體拉近以作為修復模板。

3. 凋亡信號轉導：Rad21已被證實可被caspase蛋白酶切割。在凋亡信號通路中，caspase介導的Rad21切割觸發姐妹染色單體的過早分離，是凋亡程序性細胞死亡的生化標志之一。

七、使用注意事項

1. 疊氮化鈉警示：緩沖液含0.09%疊氮化鈉，該化合物具毒性，操作時請佩戴手套和護目鏡，避免接觸皮膚或吸入氣溶膠。

2. 高濃度特性：本抗體濃度為1000 ?g/ml（1 mg/ml），屬于高濃度制劑。進行IP實驗時按6 ?g/mg裂解物用量吸取少量即可，建議使用低吸附吸頭以提高移液準確性。

3. IP用量計算：推薦用量為6 ?g抗體/mg總蛋白裂解物。示例：若細胞裂解物總蛋白為2 mg，則需加入12 ?g抗體（即12 ?l，因濃度為1 ?g/?l）。

4. 二抗選擇：

檢測細胞裂解物WB時，可使用識別重鏈和輕鏈的二抗（如A120-101P）

檢測IP產物WB時，建議使用抗兔IgG輕鏈HRP標記抗體，并添加5%正常豬血清以降低非特異性背景。雖然Rad21分子量（約75 kDa）與抗體重鏈（約55 kDa）位置不同，使用輕鏈特異性二抗仍可消除任何潛在的重鏈干擾，并提高實驗結果的專業性。

5. 過夜孵育要求：WB實驗中一抗需過夜孵育（建議4°C緩慢搖動），請勿縮短至室溫1–2小時，否則可能顯著降低檢測靈敏度，特別是在檢測低豐度Rad21或切割片段時。

6. 反應種屬確認：本經驗證可識別人和小鼠Rad21。對于大鼠等其他物種，建議通過序列比對評估交叉反應可能性，并進行預實驗驗證。

7. Caspase切割產物的檢測：由于本抗體識別的表位位于C末端（581–631位氨基酸），而caspase切割位點位于C末端區域附近，因此該抗體可能無法檢測被切割后釋放的C末端小片段，但可識別保留完整C末端的全長Rad21及N末端切割產物。設計凋亡實驗時請注意此特性。

*本說明書基于產品特性研究編寫，使用者應結合具體實驗體系進行優化驗證。