兔抗V5標簽抗體親和純化：從低豐度到高表達的精準定量方案

一、產品概述

V5標簽是一種由14個氨基酸殘基組成的短肽標簽，序列為GKPIPNPLLGLDST，源自猴副流感病毒5型（Simian virus 5）RNA聚合酶α亞基。作為一種表位標簽，V5標簽具有分子量?。s1.4 kDa）、免疫原性低、不易干擾融合蛋白天然構象和功能的優點，廣泛應用于重組蛋白的檢測、純化及定位研究。與其它常用標簽（如FLAG、HA、c-Myc）相比，V5標簽尤其適合用于需要維持蛋白天然活性的實驗體系。

本文介紹艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的兔抗V5標簽抗體親和純化（貨號：A190-120A），適用于酶聯免疫吸附測定（ELISA）、免疫細胞化學（ICC）、免疫沉淀（IP）及免疫印跡（WB）等多種檢測平臺。

二、核心規格參數

參數 | 詳細信息

靶標 | V5標簽（GKPIPNPLLGLDST）

應用 | ELISA, ICC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

同型 | IgG

標記 | 非偶聯

純度 | 抗原親和純化

濃度 | 1 mg/ml

儲存條件 | 2 - 8 °C

保質期 | 收貨后1年

緩沖液 | 磷酸鹽緩沖液（PBS），含0.09%疊氮化鈉

三、免疫原與生產工藝

免疫原設計

本抗體采用合成肽作為免疫原。該合成肽對應V5標簽的全長氨基酸序列，即猴副流感病毒5型RNA聚合酶α亞基的第95至108位殘基（序列：GKPIPNPLLGLDST）。為提高免疫原性，該合成肽與匙孔血藍蛋白（KLH）進行化學交聯偶聯，隨后用于兔免疫。

純化方法

抗血清經采集后，通過親和層析法純化。將V5標簽合成肽固定在固相支持物上，從抗血清中特異性捕獲識別V5標簽的抗體，經洗脫后獲得高純度、高特異性的多克隆抗體。此工藝有效去除了不識別V5標簽的非特異性IgG，確?？贵w在各類應用中的低背景和高信噪比。

濃度測定

免疫球蛋白濃度采用比爾定律測定。標準條件下，1 mg/mL IgG在280 nm波長處的吸光度（A280）為1.4。本抗體濃度為1 mg/ml。對于酶偶聯物（如HRP標記版本），酶/抗體蛋白的摩爾比為4:1（本產品為非偶聯版本，此信息供參考）。

四、應用與實驗條件

重要提示

并非所有列出的應用均已在本實驗室經過具體測試。用戶需根據自身實驗體系進行優化和驗證。以下推薦條件基于產品說明及行業通用經驗。

通用說明

所有免疫印跡實驗均采用5%脫脂牛奶-TBST作為封閉液及抗體稀釋液。一抗孵育條件為過夜孵育（推薦4°C）。

推薦稀釋比例與用量

應用 | 推薦稀釋比例/用量 | 說明

ELISA | 1:1000 - 1:30000（檢測用）；1:100 - 1:500（包板用） | 作為檢測抗體時，建議從1:5000開始優化；作為包被抗體時，用PBS稀釋后包被ELISA板

免疫細胞化學（ICC） | 1:100 - 1:400 | 建議使用4%多聚甲醛固定細胞，0.1% Triton X-100透化

免疫沉淀（IP） | 1 - 4 ?g/mg 裂解物 | 具體用量取決于V5標簽融合蛋白的表達水平

免疫印跡（WB） | 1:1000 - 1:30000 | 建議從1:5000開始進行梯度預實驗

五、二抗選擇說明

細胞裂解物免疫印跡：

使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）。該二抗可同時識別兔IgG的重鏈和輕鏈，適用于檢測總IgG信號。

免疫沉淀產物的免疫印跡：

使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）。采用輕鏈特異性二抗可有效避免免疫沉淀中抗體重鏈（約55 kDa）信號的干擾，尤其當目標融合蛋白分子量接近55 kDa時尤為重要。

六、產品使用與儲存

儲存注意事項

抗體應儲存于2 - 8°C，請勿冷凍。反復凍融會導致抗體聚集和活性下降。緩沖液為PBS，含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。

穩定性與保質期

自收貨之日起，在推薦的儲存條件下保質期為1年。建議分裝為單次使用量儲存于2-8°C，避免反復開蓋引入污染。

七、V5標簽的技術優勢

V5標簽（14個氨基酸，GKPIPNPLLGLDST）具有以下特點，使其成為蛋白檢測的優選標簽：

1. 分子量極小：約1.4 kDa，遠小于GFP（27 kDa）或GST（26 kDa），對融合蛋白的天然結構、互作及生物學功能干擾極小。

2. 高免疫原性：該序列在哺乳動物蛋白質組中罕見，抗V5抗體與非特異性蛋白的交叉反應風險低。

3. 多位置兼容：可融合于目標蛋白的N末端、C末端或內部環區，通常不影響蛋白的折疊和活性。

4. 檢測靈敏度高：本抗體在WB中稀釋比可達1:30,000，ELISA中可達1:30,000，足以檢測低豐度表達的重組蛋白。